本文關(guān)鍵詞：恩度對(duì)順鉑耐藥卵巢癌腫瘤血管生成及正常化的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的卵巢癌因其早期即可發(fā)生盆腔、腹腔內(nèi)種植轉(zhuǎn)移及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,臨床癥狀不明顯,發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,惡性程度高等原因,死亡率一直居于婦科腫瘤之首,嚴(yán)重威脅婦女的生命健康。盡管治療上經(jīng)歷了手術(shù)及放化療,但復(fù)發(fā)率卻高達(dá)60%,且復(fù)發(fā)后大部分患者對(duì)作為一線化療藥物的順鉑產(chǎn)生耐藥,致使預(yù)后極差。因此有必要尋找一種新的有效的治療方法,全面提高卵巢癌患者的總體生存率,改善患者的生活質(zhì)量。卵巢上皮性癌同其他各種實(shí)體瘤一樣,其生長(zhǎng)為血管依賴性的。腫瘤的發(fā)展依靠新生血管為其供應(yīng)養(yǎng)料和氧氣,同時(shí)又通過新生血管不斷向四周及遠(yuǎn)處運(yùn)送腫瘤細(xì)胞,致使腫瘤轉(zhuǎn)移。于是,如果能有效的抑制新生血管的生成,就可以達(dá)到抑制腫瘤發(fā)展及轉(zhuǎn)移的目的。腫瘤血管結(jié)構(gòu)的異常也會(huì)導(dǎo)致血管功能的異常。腫瘤血管由于具有不完整性,可導(dǎo)致血流紊亂,無效循環(huán)增加,腫瘤血流在時(shí)間及空間上形成異質(zhì)性,最終引起的腫瘤血流的動(dòng)態(tài)變化可直接影響腫瘤微環(huán)境的代謝,主要表現(xiàn)為缺氧和酸中毒。而低pH及酸中毒互為因果,不斷加劇,最終導(dǎo)致化療藥物輸送的減少及放療抵抗。所以,能否使異常的腫瘤血管趨近正常,繼而可以更有效的將氧氣及藥物輸送到腫瘤細(xì)胞,進(jìn)而提高治療效果?恩度是一種可溶性的抗血管生成的新式抑制劑,能選擇性的抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移及血管構(gòu)成。已有研究闡明,抗血管生成藥物可使腫瘤血管呈現(xiàn)暫時(shí)的正�；１狙芯繉�(shí)驗(yàn)分為兩部分：一、通過觀察恩度對(duì)SKOV3/DDP腫瘤細(xì)胞上清液誘導(dǎo)的HUVECs增殖、遷移及成管的作用,探討恩度對(duì)卵巢癌腫瘤新生血管的影響；二、在成功建立的卵巢癌裸小鼠原位移植模型上觀察恩度使腫瘤血管“正�；钡臅r(shí)間窗。方法第一部分：SKOV3/DDP腫瘤細(xì)胞上清液的制備：培養(yǎng)SKOV3/DDP細(xì)胞,當(dāng)其融匯度至70%～80%時(shí),換以無血清RPMI-1640培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)24h,離心收集上清,將其與含10%FBS的RPMI-1640培養(yǎng)基以1：4混合備用。MTT法觀察恩度濃度為10-7,10-4,10-5,10-4,10-3,10-2及10-1mg/ml時(shí),藥物對(duì)SKOV3/DDP月中瘤細(xì)胞上清液誘導(dǎo)的HUVECs增殖作用的影響。時(shí)間設(shè)定為24h,48h,72h三個(gè)點(diǎn)。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)觀察恩度對(duì)SK0V3/DDP,腫瘤細(xì)胞上清液誘導(dǎo)過的HUVECs遷移的影響。細(xì)胞在6孔板中融合度達(dá)到90%后,用20p 1的槍頭垂直劃痕,用1×PBS沖洗漂浮細(xì)胞。設(shè)定恩度濃度為10-6,10-4,10-2mg/ml,繼續(xù)于無血清RMPI-1640培養(yǎng)基中孵育6小時(shí)后,直接在倒置相差顯微鏡下拍照。使用ImageJ軟件測(cè)量?jī)啥思?xì)胞的間距,計(jì)算遷移率,繪制圖表,用SPSS18.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,比較各組遷移情況。成管實(shí)驗(yàn)觀察恩度對(duì)SK0V3/DDP腫瘤細(xì)胞上清液誘導(dǎo)過的HUVECs在血管形成中的影響。待Matrigel完全呈流動(dòng)液態(tài)后鋪96孔板,每孔50u 1,置于37-C培養(yǎng)箱放置30min使之凝固。計(jì)數(shù)調(diào)節(jié)HUVECs細(xì)胞至1×105個(gè)/ml,設(shè)立對(duì)照孔,使恩度終濃度分別為10-6,10-4,10-2mg/ml,37℃恒溫箱中繼續(xù)孵育4h后于倒置顯微鏡下察看血管形成情況并拍照。使用ImageJ軟件測(cè)量細(xì)胞成管的長(zhǎng)度,計(jì)算在不同濃度恩度作用下HUVECs的成管率,繪制圖表,用SPSS18.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,比較各組管腔形成情況。第二部分：MTT法明確SK0V3/DDP細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥性。設(shè)定培養(yǎng)板中順鉑的濃度分別為0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4、12.8μg/ml,在恒溫培養(yǎng)箱中孵育48h后,用全自動(dòng)酶標(biāo)儀選擇490nm的波長(zhǎng)檢測(cè)出溶液吸光值,記錄分析數(shù)據(jù),并繪制出不同藥物濃度下的細(xì)胞存活生長(zhǎng)曲線。裸小鼠卵巢原位移植模型使用SK0V3/DDP細(xì)胞系。建立卵巢癌模型時(shí),先將計(jì)數(shù)后的SK0V3/DDP細(xì)胞注射到雌性裸小鼠頸部皮下,待皮下瘤直徑1cm后將小鼠拖頸處死,超凈臺(tái)內(nèi)將皮下瘤取出切成小塊,而后將小塊瘤組織植入剩余雌性裸小鼠左側(cè)卵巢內(nèi),持續(xù)追蹤觀察原位移植腫瘤在裸小鼠卵巢內(nèi)的生長(zhǎng)狀況。當(dāng)腹部可捫及腫塊時(shí)將荷瘤鼠處死,解剖并取出原位移植處的腫瘤,與正常裸小鼠卵巢組織及皮下腫瘤組織均做病理切片,HE染色后進(jìn)行觀察。確定模型構(gòu)建成功后,將30只滿足實(shí)驗(yàn)要求的裸小鼠原位移植模型隨機(jī)分為6組,每組5只：其中3組每次腹腔注射恩度10mg/kg,一次注射量均為0.2ml,在第3、6、9天分別各處死一組,對(duì)照組為剩余3組,每日腹腔內(nèi)注射生理鹽水0.2ml,在對(duì)應(yīng)時(shí)間內(nèi)處死。恩度處理不同時(shí)間后,用CD31染色檢測(cè)腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞完整性。ImageJ軟件進(jìn)行完整血管的計(jì)數(shù),被抗體染色的細(xì)胞,要形成一個(gè)完整的管腔結(jié)構(gòu)才認(rèn)為是一個(gè)可計(jì)數(shù)的血管。結(jié)果一部分：不同濃度的恩度(10-1,10-6,10-5,10-4,10-3,10-2,10-1mg/ml)分別處理HUVECs細(xì)胞24h,48h,72h后,對(duì)細(xì)胞增殖無明顯影響,各組間存活率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。恩度給藥組劃痕區(qū)間距相較對(duì)照組大,兩兩比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。而不同濃度藥物對(duì)HUVECs細(xì)胞遷移作用未有明顯差異,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組均有管腔形成,分布均勻,鏡下未見明顯差異,用ImageJ圖像分析軟件計(jì)算細(xì)胞成管長(zhǎng)度后發(fā)現(xiàn),對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組差異不明顯,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。二部分：順鉑對(duì)SK0V3/DDP及SK0V3細(xì)胞的IC50分別為(11.647±1.078)μg/ml和(2.486±0.983)u g/ml,表明人卵巢漿液性乳頭狀囊腺癌細(xì)胞耐藥株較敏感株而言,對(duì)順鉑的作用不明顯,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=2.386,P0.05)。荷瘤裸小鼠在處死后剖腹探查時(shí)可見原位移植處局部有癌腫包塊形成,與周圍組織有粘連,病理切片顯示原位瘤塊具有癌細(xì)胞的明顯特征。3、6、9天對(duì)照組腫瘤血管結(jié)構(gòu)紊亂迂曲、管徑不一,且分支多,絕大多數(shù)外周被覆不完整的內(nèi)皮細(xì)胞。而恩度給藥3天及9天的血管完整性增加(23%±4.58%,17.67%±8.34%,P0.05),分支較少；特別是給藥6天后發(fā)現(xiàn),血管管壁完整,直徑均勻,完整性明顯增加(75.33%±8.02%,P0.O1VS3天及9天)。結(jié)論一部分：恩度對(duì)SK0V3/DDP腫瘤細(xì)胞上清液誘導(dǎo)的HUVECs增殖及管腔形成無明顯作用,對(duì)細(xì)胞遷移作用欠佳。二部分：成功的利用SK0V3/DDP腫瘤細(xì)胞建立了裸小鼠卵巢原位移植移植模型。基于模型基礎(chǔ)上給藥后發(fā)現(xiàn),恩度能夠在治療第6天時(shí)使耐藥性卵巢癌腫瘤血管產(chǎn)生一個(gè)明顯的正�；皶r(shí)間窗”,該時(shí)期較為短暫,但完整性極佳。
【關(guān)鍵詞】：恩度 順鉑耐藥性卵巢癌 腫瘤血管正�；�
【學(xué)位授予單位】：長(zhǎng)江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.31
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文符號(hào)縮寫詞表11-13
• 第一部分 恩度對(duì)腫瘤上清液誘導(dǎo)的HUVECs增殖、遷移及成管的影響13-25
• 引言13-14
• 第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料及方法14-19
• 第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果19-22
• 第三節(jié) 討論22-25
• 第二部分 恩度使腫瘤血管“正�；睍r(shí)間窗的觀察25-37
• 引言25-26
• 第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料及方法26-31
• 第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-34
• 第三節(jié) 討論34-37
• 參考文獻(xiàn)37-41
• 綜述41-49
• 參考文獻(xiàn)45-49
• 致謝49-50
• 個(gè)人簡(jiǎn)介50-51

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  本文關(guān)鍵詞：恩度對(duì)順鉑耐藥卵巢癌腫瘤血管生成及正常化的實(shí)驗(yàn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：372704