發(fā)布時間：2021-11-28 06:13

　　目的:通過比較不同人類乳頭瘤病毒（Human Papillomavirus,HPV）感染狀態(tài)下宮頸癌外泌體Mortalin（Exo-Mortalin）表達差異,明確HPV感染通過轉錄因子CTCF調控Exo-Mortalin表達的上游機制;探究癌源Exo-Mortalin對永生化宮頸上皮細胞H8的惡性表型轉化作用;闡釋Exo-Mortalin在永生化宮頸上皮細胞H8內通過Mortalin-p53-Gadd45A通路發(fā)揮作用的下游機制。方法:利用超高速離心法提取宮頸癌細胞系外泌體,通過蛋白免疫印跡（Western Blot,WB）、透射電鏡（TEM）以及納米粒子示蹤分析（NTA）對外泌體進行鑒定。分別利用CRISPR/Cas9和慢病毒技術構建KoHPV-E6/E7-SiHa（Knockout-HPVE6/E7-SiHa）穩(wěn)轉細胞系以及 KdMortalin-SiHa/Caski（Kncokdown-Mortalin-SiHa/Caski）細胞株。利用 WB 技術檢測 Exo-Mortalin、CTCF、HPVE6/E7、p53及Gadd45A的表達情況。采用熒光素酶實驗驗證CTCF對Mor... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學廣東省

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１．外泌體的鑒定

?的存在與細胞外泌體的Ｍｏｒｔａｌｉｎ表達的關系。如圖ｌ－２ｂ所示，ＳｉＨａ組Ｍｏｒｔａｌｉｎ??表達量比Ｃ－３３Ａ組更高。??ａ?ｂ??ＳｉＨａ?Ｃ－３３Ａ?Ｈ８?ＳｉＨａ?Ｅｘｏｓ?Ｃ－３３Ａ?Ｅｘｏｓ??Ｍｏｒｔａｌｉｎ?＿?丨丨’?丨一－丨丨丨＿＿一?—＾￣－＾?與?７０ｋＤ?Ｍｏｒｔａｌｉｎ?７０?ｋＤ??ｃｄ６３?４２?ＫＤ??ｈｐｖ?Ｅ６?１３?ｋＤ??ｇａｐｄｈ?ｍｍｍｍｍ?ｍｍｍｍｒｎｍ?ｍｍｍｍｍｍ?３７?ｋＤ?ＣＤ９?２３?ｋＤ??圖１－２．?ＨＰＶ（＋）／（－）宮頸癌細胞及外泌體Ｍｏｒｔａｌｉｎ的表達對比。（ａ）通過ＷＢ比較ＳｉＨａ??與Ｃ－３３Ａ細胞內Ｍｏｒｔａｌｉｎ表達，結果顯示ＨＰＶ陽性的ＳｉＨａ細胞內Ｍｏｒｔａｌｉｎ表達更高，ｐ５３??含量相對降低。（ｂ）提取兩種細胞外泌體后，ＷＢ顯不Ｍｏｒｔａｌｉｎ在ＳｉＨａ外泌體（ＳｉＨａ－ｅｘｏｓ）??內表達含量更高。??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２．?Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｏｆ?ｍｏｒｔａｌｉｎ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｉｎ?ＨＰＶ?（＋）?／（－）?ｃｅｒｖｉｃａｌ?ｃａｎｃｅｒ?ｃｅｌｌｓ?ａｎｄ??ｅｘｏｓｏｍｅｓ．?（ａ）?Ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ｍｏｒｔａｌｉｎ?ｉｎ?ＳｉＨａ?ａｎｄ?ｃ－３３ａ?ｃｅｌｌｓ?ｗａｓ?ｃｏｍｐａｒｅｄ?ｂｙ?ＷＢ．?Ｔｈｅ??ｒｅｓｕｌｔｓ?ｓｈｏｗｅｄ?ｔｈａｔ?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ｍｏｒｔａｌｉｎ?ｉｎ?ＳｉＨａ?ｃｅｌｌｓ?ｗｉｔｈ?ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ＨＰＶ?ｗａｓ?ｈｉｇｈｅｒ，?ａｎｄ?ｔｈｅ??ｃｏｎｔｅｎｔ?ｏｆ?ｐ５３?ｗａｓ?ｌｏｗｅｒ，?（ｂ）?Ａ

Ｍｏｒｔａｌｉｎ?＾＊＊＊＊＾，?？?７０?ｋＤ?ｇ?１５??ＨＰＶＥ６?１５?ｋＤ?｜?ｉ－〇?麵??ＨＰＶ?Ｅ７?■■■＇■＂?－?１１?ｋＤ?，３?〇５??…??ｇａｐｄｈ?＇ｍｍ１１１１１＊關丨丨—１?＊７?ｋＤ?至１?ｉＴｐ?ｔ?辛??白??，，，，??ｑ?Ｅｘｏｓｏｍｅｓ?＾?＾??ＳｉＨａ?Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＫｏＥ６／Ｅ７?ＳｉＨａ??Ｍｏｒｔａｌｉｎ?場?７０?ｋＤ??ＣＤ６３?４３?ｋＤ??ｃ〇９?２３?ｋＤ??圖１－３．?ＫｏＨＰＶＥ６／Ｅ７－ＳｉＨａ細胞構建及其細胞和外泌體Ｍｏｒｔａｌｉｎ表達變化，（ａ）對ＳｉＨａ??細胞敲除ＨＰＶＥ６／Ｅ７后，ＨＰＶＥ６和Ｅ７的蛋白表達量降低，同時Ｍｏｒｔａｌｉｎ含量隨之Ｆ降。（ｂ）??２１??


本文編號：3523870