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基于滋養(yǎng)層細胞的ER-LDA檢測方法的建立、鑒定及其在地中海貧血無創(chuàng)產前診斷中的初步應用研究

發(fā)布時間:2021-11-01 07:48
  研究背景與目的母體產道中的脫落胎兒細胞由于含有完整的細胞結構以及胎兒的整套基因組信息,而在非整倍體疾病、染色體微缺失、單基因性疾病以及新生兒溶血病等遺傳性疾病的無創(chuàng)產前診斷中發(fā)揮著重要的作用。然而,脫落胎兒細胞的分離與鑒定仍缺乏快速、有效的檢測方法;此外,目前尚缺乏對這些稀有細胞進行充分的胎源性驗證;另外,目前這些稀有胎兒細胞在單基因性疾病的產前診斷應用仍需探究。因此,在本課題中,我們將建立一種快速、簡便、有效的方法,用于脫落滋養(yǎng)層細胞的鑒定與分離;同時,我們將單細胞分離的胎兒細胞進行深入的、多位點的胎源性驗證;在第三部分中,我們還將這些稀有細胞運用于地中海貧血的產前診斷中,并通過高通量測序分析,從而評估其在地中海貧血等單基因性疾病中的應用。研究方法1.通過ddPCR與qPCR評估脫落胎兒細胞的數(shù)目;通過顯微鏡熒光定量與流式細胞術等評估滋養(yǎng)層細胞與母體細胞差異,建立脫落滋養(yǎng)層細胞新型鑒定方法(內質網染色結合線性判別分析,ER-LDA);評估ER-LDA在細胞系模型與臨床標本中的檢測效果。2.通過單細胞分離,獲取滋養(yǎng)層單細胞;通過免疫熒光分析脫落滋養(yǎng)層細胞的蛋白標志物表達情況;通過熒光原... 

【文章來源】:南方醫(yī)科大學廣東省

【文章頁數(shù)】:142 頁

【學位級別】:博士

【部分圖文】:

基于滋養(yǎng)層細胞的ER-LDA檢測方法的建立、鑒定及其在地中海貧血無創(chuàng)產前診斷中的初步應用研究


圖1-2脫落細胞樣本進行免疫熒光鑒定

滋養(yǎng)層,細胞,基因表達,宮頸


?第一章新型滋養(yǎng)層細胞鑒定方法ER-LDA的建立???Trophoblastic?cell?Cervical?epithelial?cell?調??■H?pDIA3??七一?I:...:''Q?RRBP1??CYP51A1??fl■■隱?1??「■畫醒?PSMD1??j1-■■麵一?PSMD2??PRKCSH??RPN1??KTN1?????CALR??BCAP31??i?HSEC6lB??■?RPN2??S?HSP90B1??CANX??DDOST??1?■■■■■Humumni?p4hb??c/VV%,??圖1-3滋養(yǎng)層細胞中ER相關的基因表達升高。通過MERAV數(shù)據(jù),分析與ER活性或功能??相關的基因在滋養(yǎng)層細胞與宮頸上皮細胞中的表達量,結果顯示與宮頸上皮細胞相比,大部??分ER相關的基因在滋養(yǎng)層細胞中表達升高。??Figure?1-3.?ER-related?genes?are?higlily?expressed?in?trophoblastic?cells.?Based?on?publicly??available?data?base,?MERAV,?the?heatmap?shows?tliat?the?expression?level?of?ER-related?genes?is??higher?than?that?of?cemcal?epithelial?cells.??28??

滋養(yǎng)層,細胞,白細胞,鱗狀


?博士學位論文???A?10]?1?巳?8-1???'/?/?聲?/?/?/?^??/??q?D?E^TYacker?CFD^E??ER-tracker?DAPI?Bright?field?Merge??■參■■■??BnahUield??HB?議讓.::.e??瞧倫。??1^1?:?A??■■_H?l?i??■■■■??■?White?blood?cells??0?103?104?105??Fluorescence?intensity??圖1-4滋養(yǎng)層細胞與鱗狀上皮細胞、白細胞的ER熒光強度分析。(A)滋養(yǎng)層細胞與鱗狀??上皮細胞的熒光差異分析。(B)滋養(yǎng)層細胞與白細胞的熒光差異分析。(C)共聚焦顯微鏡??分析滋養(yǎng)層細胞與鱗狀上皮細胞、白細胞的ER熒光強度差異。(D)CFDA-SE預標的滋養(yǎng)??層細胞摻入Pap標本中進汙ER染色分析。白色箭頭指示的是滋養(yǎng)層細胞,黃色箭頭指示的??是鱗狀上皮細胞。(E)流式細胞術分析滋養(yǎng)層細胞U鱗狀上皮細胞、白細胞的ER熒光差異。??Figure?1-4.?The?relative?fluorescence?intensity?of?ER-tracker?in?three?trophoblastic?cell?lines,??HTR8-S/Vneo,?JEG-3,?and?JAR,?and?in?squamous?epithelial?cells?and?white?blood?cells?taken?from??healthy?female?donors?(A,?B).?(C)?Cells?are?stained?with?ER-Tracker?Red?a


本文編號:3469789

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