目的:利用慢病毒介導的RNA干擾（RNAi）技術,構建穩(wěn)定敲降NF-YB基因的HeLa細胞系。方法:設計shRNA-NF-YB引物,利用分子克隆技術構建H1/GFP-Puro-shRNA-NF-YB質粒,轉染293T后收集病毒感染HeLa細胞;用嘌呤霉素篩選細胞得到穩(wěn)定敲降細胞株;利用Western blot和實時熒光定量PCR對細胞系進行鑒定。結果:構建的質粒經測序后與設計的引物對比序列一致,Western blot和實時熒光定量PCR結果表明構建細胞的NF-YB蛋白和mRNA表達抑制效果明顯。結論:本實驗成功構建了NF-YB-shRNA-HeLa細胞系,獲得了特異性NF-YB基因敲降的HeLa細胞。 

【文章來源】：癌變·畸變·突變. 2020,32(06)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

靶序列測序結果

q PCR檢測結果

RNA干擾技術被Jorgensen R發(fā)現(xiàn)報道，他在牽�；ㄖ袑肷睾铣苫蚝螅粌H想要的色素沒有合成，插入的基因也沒有表達，這種現(xiàn)象被稱為共抑制[18]。直到Fire等[19]研究結果表明在導入了雙鏈RNA后會導致目的基因的特異性沉默，才將其命名為RNA干擾。2002年RNA干擾技術被Science和Nature評為重大科技成果之一，它具有高效性、高特異性等特點[20]。短發(fā)夾RNA(shRNA)，包含一個Loop結構，可加工成siRNA，也可通過與目標mRNA互補結合序列特異性地實現(xiàn)靶mRNA降解。使用細菌或病毒載體，被導入靶細胞的細胞核內，在某些情況下，載體可以穩(wěn)定地整合到基因組中。圖3 q PCR檢測結果

【參考文獻】：
期刊論文
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