我國癌癥的發(fā)病率和死亡率近年來均保持上升趨勢。越來越多的研究發(fā)現,長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA,lncRNA）在多種組織的癌變、侵襲和轉移過程中發(fā)揮重要功能,扮演著腫瘤抑制基因或致癌基因的角色。近年來隨著細胞分子生物學的飛速發(fā)展,研究發(fā)現許多長鏈非編碼RNAs廣泛參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展和化療耐藥等過程。LncRNAs是長度大于200個核苷酸的非編碼RNAs（ncRNAs）。LncRNAs在劑量補償效應、表觀遺傳調控、細胞周期調控和細胞分化調節(jié)等方面發(fā)揮重要作用。LncRNAs作為能夠直接影響細胞信號傳導、細胞增殖分化的基因,在許多生物學過程中起重要的調控作用。對于此類新興分子標記的研究不僅能使我們對于腫瘤的了解更近一步,甚至還有希望使之成為腫瘤診斷的生物學標記和治療的細胞內靶點。鑒于lncRNAs在腫瘤臨床診斷和治療方面具有廣闊的前景,以lncRNAs為靶點開發(fā)抗腫瘤新藥必將成為未來抗腫瘤藥物研發(fā)的新趨勢。首先通過文獻篩選出的lncRNAs,采用RT-qPCR技術,并將CCAT2、LINC00511、LINC01133分別在正常人和結直腸癌患者血清組中進行驗證,... 

【文章來源】：北京協和醫(yī)學院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數】：109 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
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中文摘要
Abstract
第一部分 長鏈非編碼RNAs作為結直腸癌候選腫瘤標志物的診斷價值研究
    前言
    材料與方法
        一、主要儀器
        二、主要試劑及耗材
        三、實驗方法
    實驗結果
        一、候選LncRNAs的確定
        二、研究對象的臨床資料
        三、候選血清長鏈非編碼RNAs在正常對照組和結直腸癌患者中的表達差異
        四、3種長鏈非編碼RNAs作為結直腸癌血清標志物的ROC分析
        五、血清長鏈非編碼RNAs與結直腸癌臨床特征的相關性分析
    討論
第二部分 LncRNAs作為宮頸癌候選腫瘤標志物的診斷價值研究
    前言
    材料與方法
    實驗結果
        一、研究對象的臨床資料
        二、候選血清長鏈非編碼RNAs在宮頸癌患者和正常對照組中的表達差異
        三、3種長鏈非編碼RNAs作為宮頸癌血清標志物的ROC分析
        四、血清長鏈非編碼RNAs診斷模型與宮頸癌臨床特征的相關性分析
        五、正常對照、宮頸上皮樣瘤變與宮頸癌患者血清之間的差異性表達
        六、2種長鏈非編碼RNAs對宮頸上皮樣瘤變的ROC分析
        七、2種長鏈非編碼RNAs對宮頸上皮樣瘤變與宮頸癌的ROC分析
    討論
第三部分 LINC00673在宮頸癌中的功能研究
    前言
    實驗材料
        一、宮頸癌患者血清標本
        二、細胞系
        三、主要試劑
        四、主要儀器
        五、計算機分析軟件
        六、主要溶液的配制
    實驗方法
        一、血清的收集和總RNA的提取
        二、細胞總RNA的提取
        三、cDNA合成
        四、實時定量PCR分析
        五、細胞系及其培養(yǎng)
        六、感受態(tài)細菌的制備
        七、感受態(tài)細菌的轉化
        八、質粒中提
        九、慢病毒表達載體pLVX-Puro LINC00673構建
        十、慢病毒制備及穩(wěn)轉細胞系的構建
        十一、MTT法測定細胞生長曲線
        十二、平板克隆形成實驗
        十三、流式檢測細胞周期實驗
        十四、細胞遷移實驗
        十五、細胞侵襲實驗
        十六、裸鼠皮下成瘤實驗
        十七、Western blot
        十八、統(tǒng)計方法
    實驗結果
        一、LINC00673在宮頸癌患者及宮頸上皮樣瘤變患者血清中表達升高
        二、LINC00673過表達穩(wěn)轉細胞系建立
        三、LINC00673對宮頸癌細胞惡性表型的影響
        四、順鉑處理后的HeLa細胞中LINC00673表達變化
        五、過表達LINC00673對宮頸癌細胞順鉑化療耐受情況的影響
        六、過表達LINC00673促進HeLa細胞在裸鼠體內的成瘤能力
        七、與LINC00673表達相關的信號通路檢測
    討論
第四部分 SLC25A25-AS1在宮頸癌中的功能研究
    前言
    材料與方法
    實驗結果
        一、SLC25A25-AS1在宮頸癌患者及宮頸上皮樣瘤變患者血清中表達降低
        二、SLC25A25-AS1對宮頸癌細胞系惡性表型的影響
        三、順鉑處理后的HeLa細胞中SLC25A25-AS1表達變化
        四、過表達SLC25A25-AS1對宮頸癌細胞順鉑化療耐受情況的影響
        五、過表達SLC25A25-AS1抑制HeLa的遷移能力
        六、過表達SLC25A25-AS1抑制HeLa的侵襲能力
        七、過表達SLC25A25-AS1抑制HeLa在裸鼠體內的成瘤能力
        八、與SLC25A25-AS1相關的信號通路
    討論
參考文獻
文獻綜述
    參考文獻
基金資助
個人簡歷
致謝



本文編號：3200598