目的:研究DNMT抑制劑5-氮雜-2-脫氧胞苷提高KLE細(xì)胞對孕激素類藥物醋酸甲羥孕酮的藥物敏感性,并初步探究5-氮雜-2-脫氧胞苷在細(xì)胞內(nèi)的作用方式及其可能機(jī)制,進(jìn)而為臨床上孕激素治療子宮內(nèi)膜癌不理想的患者提供新的治療思路與理論依據(jù)。方法:首先提取正常人和子宮內(nèi)膜癌患者的組織DNA為模板,對其用亞硫酸氫鈉進(jìn)行甲基化修飾,設(shè)計(jì)甲基化特異性PCR的實(shí)驗(yàn)方案,從引物量,模板量,退火溫度、循環(huán)數(shù)方面,確定甲基化特異性PCR對DNA甲基化檢測的最佳條件。然后在最佳檢測條件下對正常人以及子宮內(nèi)膜癌患者組織進(jìn)行DNA甲基化情況的檢測。體外培養(yǎng)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株KLE與Ishikawa,用DNMT抑制劑5-氮雜-2-脫氧胞苷處理細(xì)胞株后,檢測細(xì)胞用藥前后的DNA甲基化情況以及孕激素受體B的蛋白表達(dá)情況,并確定最佳的藥物濃度與藥物處理時間。聯(lián)合應(yīng)用DNMT抑制劑5-氮雜-2-脫氧胞苷與孕激素類藥物醋酸甲羥孕酮處理KLE細(xì)胞株,觀察聯(lián)合用藥對于子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的抑制率。熒光定量PCR檢測用藥前后細(xì)胞內(nèi)DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的mRNA表達(dá)情況。結(jié)果:1、利用甲基化特異性PCR技術(shù)成功檢測了子宮內(nèi)膜癌患者以及健康人群... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
第2章 實(shí)驗(yàn)材料
    2.1 主要儀器
    2.2 主要試劑
    2.3 相關(guān)試劑盒
第3章 實(shí)驗(yàn)方法
    3.1 主要溶液的配制
    3.2 引物設(shè)計(jì)
    3.3 樣本采集
    3.4 DNA甲基化的檢測
    3.5 細(xì)胞培養(yǎng)
    3.6 ADC處理KLE細(xì)胞前后DNA甲基化情況
    3.7 Western Blot檢測ADC處理后PRB蛋白的表達(dá)
    3.8 MTT法檢測藥物處理后對KLE細(xì)胞系增殖的影響
    3.9 熒光定量PCR檢測藥物處理前后KLE細(xì)胞DNMT的 mRNA表達(dá)
第4章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.1 組織樣本DNA甲基化的檢測及分析
    4.2 ADC處理KLE和 Ishikawa細(xì)胞前后的DNA甲基化情況檢測
    4.3 Western Blot檢測藥物處理KLE細(xì)胞前后PRB的蛋白表達(dá)情況
    4.4 MTT法檢測不同藥物處理KLE細(xì)胞后的細(xì)胞增殖情況
    4.5 熒光定量PCR檢測藥物處理前后KLE細(xì)胞DNMT的 mRNA表達(dá)情況
第5章 實(shí)驗(yàn)討論
第6章 實(shí)驗(yàn)結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
研究生期間科研成果
致謝



本文編號：3198762