目的:甲狀腺激素（TH）在腦發(fā)育過程中具有極其重要的作用。先天性甲狀腺功能減退或者妊娠期母體甲狀腺激素不足,都會不同程度地影響胎兒神經(jīng)細胞的增殖、分化、遷移、突觸的發(fā)育、髓鞘的形成及功能的完善。亞臨床甲狀腺功能減退癥（Subclinical hypothyroidism,SH）又稱亞臨床甲減。Man發(fā)現(xiàn)輕微的母親甲減就可引起后代智力評分降低,本課題組的流行病學(xué)研究結(jié)果提示妊娠中期婦女單純亞臨床甲減、單純低T₄血癥和單純TPOAb陽性皆可以使后代智力和運動發(fā)育評分下降。動物實驗研究提示亞臨床甲減母鼠可導(dǎo)致后代學(xué)習(xí)和記憶能力的下降。母鼠孕13天之前開始左旋T₄治療能夠阻止神經(jīng)細胞遷移及結(jié)構(gòu)定位破壞,并且可糾正這些蛋白含量的改變。但是母體亞臨床甲減引起后代神經(jīng)發(fā)育的確切機制還不清楚。研究證明了許多受TH調(diào)節(jié)且參與腦發(fā)育的靶分子,并且發(fā)現(xiàn)甲狀腺功能減退癥（甲減）動物模型中這些靶分子的mRNA表達低于正常動物。TH是在分子水平控制著大腦發(fā)育。TH反應(yīng)性基因?qū)H的反應(yīng)性及其mRNA和蛋白的表達有時間依賴性和組織特異性,由此推測在TH調(diào)節(jié)腦發(fā)育的過程中應(yīng)... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：99 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分:亞臨床甲減母鼠的胎/仔鼠腦發(fā)育過程中microRNA的差異性表達
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 實驗動物
            2.1.2 主要儀器設(shè)備
            2.1.3 主要試劑
        2.2 實驗分組及處理
            2.2.1 實驗動物分組
            2.2.2 實驗動物處理
        2.3 大鼠血清甲狀腺功能測定
        2.4 miRNA芯片檢測
            2.4.1 總RNA抽提
            2.4.2 RNA的純度鑒定以及含的測定
            2.4.3 靶標(biāo)制備
        2.5 芯片結(jié)果分析
        2.6 實時定量PCR
            2.6.1 miRNAs實時定量PCR檢測
            2.6.2 靶基因?qū)崟r定量PCR檢測
        2.7 統(tǒng)計學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 孕鼠血清TSH及TT4水平比較
        3.2 亞臨床甲減組與正常組相比表達差異的miRNA芯片圖譜
        3.3 甲減組與亞臨床甲減組相比表達差異的miRNA芯片圖譜
        3.4 亞臨床甲減與正常組相比表達差異的miRNAs實時定量驗證
        3.5 差異表達的miRNA靶基因?qū)崟r定量驗證
        3.6 差異表達的miRNAs靶基因GO和KEGGpathway分析
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分:miR-125b-5p在甲減母鼠后代腦組織的表達及在去甲狀腺素培養(yǎng)的C17.2神經(jīng)干細胞中的作用
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 實驗動物
            2.1.2 細胞系:HEK293、C17.2
            2.1.3 主要試劑
            2.1.4 主要儀器
            2.1.5 主要溶液及試劑的配置
        2.2 實驗方法
            2.2.1 動物造模及標(biāo)本制備
            2.2.2 甲減母鼠miRNA芯片檢測
            2.2.3 Real time PCR檢測miR-125b-5p及靶基因STAT3 mRNA表達
            2.2.4 Western blot檢測各組胎鼠腦組織STAT3蛋白表達
            2.2.5 pMIR-GLO-STAT3質(zhì)粒構(gòu)建
            2.2.6 HEK293細胞的培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染、螢光素酶檢測
            2.2.7 C17.2神經(jīng)干細胞培養(yǎng)、鑒定及轉(zhuǎn)染
            2.2.8 轉(zhuǎn)染后細胞miR-125b-5p、STAT3、TUBB3、GFAP mRNA實時定量檢測
            2.2.9 STAT3總蛋白磷酸化蛋白檢測
            2.2.10 轉(zhuǎn)染后細胞CCK-8檢測增殖
        2.3 統(tǒng)計學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 甲減母鼠E13天仔鼠芯片結(jié)果
        3.2 甲減母鼠后代miR-125b-5p和STAT3 mRNA表達量
        3.3 甲減母鼠后代STAT3總蛋白檢測結(jié)果
        3.4 質(zhì)粒結(jié)果
        3.5 螢光素酶檢測結(jié)果
        3.6 C17.2神經(jīng)干細胞鑒定
        3.7 陰離子交換樹脂對血清中甲狀腺激素清除影響
        3.8 正常組和去甲狀腺激素培養(yǎng)C17.2細胞轉(zhuǎn)染miR-125b-5p mimics STAT3 mRNA表達量檢測
        3.9 C17.2細胞轉(zhuǎn)然后STAT3總蛋白和磷酸化蛋白結(jié)果
        3.10 去甲狀腺激素培養(yǎng)C17.2神經(jīng)干細胞分化變化
        3.11 轉(zhuǎn)染miR-125b-5p mimics對細胞分化的影響
        3.12 去甲狀腺激素培養(yǎng)對C17.2神經(jīng)干細胞增殖的影響
        3.13 轉(zhuǎn)染miR-125b-5p mimics對C17.2增殖影響
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個人簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]miR-125a-5p對胰腺癌細胞增殖、凋亡和細胞周期的影響[J]. 賈叢偉,孫洋,張婷婷,盧朝輝,陳杰.  中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報. 2016(04)



本文編號：3167947