目的:探討在妊娠期糖尿�。℅DM）患者中miR-138-5p對胰島β細(xì)胞功能的影響及其相關(guān)作用機(jī)制。方法:通過RT-qPCR對比15例GDM患者與15例的正常健康孕婦外周血中miR-138-5p的表達(dá)差異; miR-138-5p mimic及inhibitor分別轉(zhuǎn)染入β細(xì)胞系INS-1細(xì)胞中,過表達(dá)或抑制其在該細(xì)胞中的表達(dá)水平,并通過RT-qPCR驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效率;利用MTT增殖實(shí)驗(yàn)、Annexin V-FITC凋亡實(shí)驗(yàn)及胰島素釋放實(shí)驗(yàn)分別檢測miR-138-5p對INS-1細(xì)胞的增殖、凋亡和胰島素釋放能力的影響;通過miRNA靶基因預(yù)測軟件Target Scan篩選miR-138-5p的目標(biāo)靶基因,并利用雙熒光素酶基因報(bào)告及Western blot實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證;功能挽救實(shí)驗(yàn)證實(shí)miR-138-5p是否通過靶向調(diào)控其目標(biāo)基因而發(fā)揮對INS-1細(xì)胞的增殖、凋亡及胰島素釋放能力影響; Western blot實(shí)驗(yàn)檢測miR-138-5p在INS-1細(xì)胞中作用的分子信號通路。結(jié)果:與正常健康孕婦相比,GDM患者外周血中miR-138-5p的表達(dá)顯著低表達(dá);在INS-1細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-138-... 

【文章來源】：中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué). 2020,25(05)CSCD

【文章頁數(shù)】：9 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 臨床標(biāo)本
    1.2 細(xì)胞系及主要試劑
    1.3 細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染
    1.4 RT-qPCR實(shí)驗(yàn)
    1.5 Ed U染色檢測細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
    1.6 Ki67法檢測細(xì)胞增殖
    1.7 凋亡實(shí)驗(yàn)
    1.8 胰島素釋放實(shí)驗(yàn)
    1.9 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測
    1.1 0 Western blot
    1.1 1 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1 GDM患者外周血中miR-138-5p表達(dá)
    2.2 轉(zhuǎn)染后β細(xì)胞中miR-138-5p的表達(dá)
    2.3 miR-138-5p對β細(xì)胞增殖的影響
    2.4 miR-138-5p對β細(xì)胞凋亡的影響
    2.5 miR-138-5p對β細(xì)胞胰島素分泌的影響
    2.6 miR-138-5p與HIF-1α的靶向關(guān)系
    2.7 功能挽救實(shí)驗(yàn)
    2.8 miR-138-5p對β細(xì)胞中PI3K/AKT信號通路的影響
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3136284