研究背景宮頸癌（Cervical cancer,CC）在世界各地癌癥相關(guān)死亡的原因中排名第四位,它是全世界婦女癌癥相關(guān)死亡的主要原因之一。盡管宮頸癌的治療方案包括放療、化療和手術(shù)等已取得了很大的進(jìn)展,但由于復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移,宮頸癌患者的5年生存率仍然不高。因此,需要開發(fā)新的診斷和治療策略,以期減少復(fù)發(fā),提高生存率。黑色素瘤相關(guān)抗原A3（Melanoma-associated antigen A3,MAGE-A3）基因是一種癌癥睪丸抗原（Cancer-testis Antigen,CTA）基因,其表達(dá)在多種惡性腫瘤中得到證實(shí),包括黑色素瘤、乳腺癌、結(jié)直腸癌、胃癌、肺癌和胰腺癌等。近年來研究表明,MAGE-A3在許多腫瘤類型中的異常表達(dá)與不良的臨床結(jié)局相關(guān)。但有關(guān)MAGE-A3在宮頸癌中的作用研究較少。為了研究MAGE-A3與宮頸癌的關(guān)系,本課題組前期研究通過實(shí)時熒光定量PCR、蛋白印跡法和免疫組化的方法,檢測了MAGE-A3在正常宮頸組織與宮頸癌組織的表達(dá)差異,結(jié)果表明,MAGE-A3在宮頸癌組織中的表達(dá)明顯高于正常組,且其表達(dá)水平與宮頸癌的臨床分期,病理分級,淋巴轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)趨勢。進(jìn)一步在宮... 

【文章來源】：河北大學(xué)河北省

【文章頁數(shù)】：91 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

qRT-PCR檢測MAGE-A3在宮頸癌細(xì)胞中mRNA的表達(dá)：四種宮頸癌細(xì)胞株中，Hela細(xì)胞中MAGE-A3的mRNA表達(dá)水平最高，Siha細(xì)胞表達(dá)水平最低

河北大學(xué)碩士學(xué)位論文16中Hela細(xì)胞中MAGE-A3蛋白表達(dá)最高，Siha細(xì)胞表達(dá)最低（圖1-2）。qRT-PCR和WB檢測四種宮頸癌細(xì)胞系中MAGE-A3的表達(dá)，均顯示Hela中表達(dá)高，Siha中表達(dá)低，故后續(xù)研究選擇Hela細(xì)胞作為MAGE-A3基因沉默實(shí)驗(yàn)對象，Siha細(xì)胞作為MAGE-A3基因過表達(dá)實(shí)驗(yàn)對象。圖1-2Westernblot檢測MAGE-A3在宮頸癌細(xì)胞中蛋白的表達(dá)：A：四種細(xì)胞蛋白電泳條帶，B：灰度值分析：Hela細(xì)胞中MAGE-A3蛋白表達(dá)最高，Siha細(xì)胞表達(dá)最低。Figure1-2ResultsofWesternblot:MAGE-A3proteinexpressionincervicalcancercells.2.2構(gòu)建MAGE-A3過表達(dá)宮頸癌細(xì)胞株應(yīng)用穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的方法，通過MAGE-A3過表達(dá)慢病毒（Lv-MAGEA3）及空載慢病毒陰性對照（Lv-NC）分別轉(zhuǎn)染Siha細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后48h開始嘌呤霉素藥篩，藥篩獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株后，應(yīng)用qRT-PCR和Westernblot檢測基因過表達(dá)效果。如圖1-3所示，根據(jù)qRT-PCR結(jié)果（表1-1，圖1-3A），MAGE-A3基因mRNA在Siha細(xì)胞空白對照組（Blank）、慢病毒陰性對照組（Lv-NC）及MAGE-A3過表達(dá)組（Lv-MAGEA3）中的相對表達(dá)量分別為1.05±0.04、1.10±0.15、8.05±0.89。LV-MAGEA3組的mRNA相對表達(dá)量較Blank組升高7.13±0.16倍。WB結(jié)果（表1-2，圖1-3B）示MAGE-A3蛋白在上述三組中的相對表達(dá)量分別為0.88±0.12、1.03±0.17、1.66±0.17。以上結(jié)果表明Siha細(xì)胞轉(zhuǎn)染MAGE-A3過表達(dá)慢病毒后，Lv-MAGEA3組的MAGE-A3mRNA和蛋白相對表達(dá)量均明顯高于Blank和Lv-NC組，P值均＜0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。而Blank和Lv-NC組中MAGE-A3的mRNA和蛋白表達(dá)無明顯差異。說明Lv-MAGEA3轉(zhuǎn)染Siha細(xì)胞可顯著上調(diào)MAGE-A3的表達(dá)。表1-1qRT-PCR檢測MAGE-A3在各組Siha細(xì)胞中mRNA相對表達(dá)量（±S）。

第一章MAGE-A3基因過表達(dá)及沉默的宮頸癌細(xì)胞株的構(gòu)建與鑒定17Table1-1TherelativeexpressionlevelofMAGE-A3mRNAineachgroupofSihacells.分組MAGE-A3t值P值Siha-Blank1.05±0.04Siha-Lv-NC1.10±0.15t=0.56vs.BlankP=0.61vs.BlankSiha-Lv-MAGEA38.05±0.89t=13.61**vs.Blankt=13.34**vs.Lv-NCP=0.00vs.BlankP=0.00vs.Lv-NC注：**P＜0.01。表1-2WB檢測MAGE-A3在各組Siha細(xì)胞中蛋白相對表達(dá)量（±S）。Table1-2TherelativeexpressionlevelofMAGE-A3proteinineachgroupofSihacells.分組MAGE-A3t值P值Siha-Blank0.88±0.12Siha-Lv-NC1.03±0.17t=1.265vs.BlankP=0.66vs.BlankSiha-Lv-MAGEA31.66±0.17t=7.14**vs.Blankt=5.87*vs.Lv-NCP=0.00vs.BlankP=0.01vs.Lv-NC注：*P＜0.05，**P＜0.01。圖1-3qRT-PCR（A）和WB（B）檢測MAGE-A3在Siha細(xì)胞中的過表達(dá)效果，*P＜0.05，**P＜0.01。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]黑色素瘤相關(guān)抗原-A3、-A9在宮頸病變的表達(dá)及臨床意義[D]. 何海鵬.河北大學(xué) 2017
[2]宮頸癌組織及細(xì)胞株中MAGE、BAGE、GAGE基因表達(dá)的研究[D]. 石琰.山東大學(xué) 2006



本文編號：3064137