褪黑激素（Melatonin）是一種由下丘腦松果體分泌的吲哚類激素,它在調(diào)節(jié)機體的晝夜節(jié)律、免疫系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、生殖和心血管系統(tǒng)中都發(fā)揮著重要的作用。褪黑激素的功能主要通過兩種位于細胞膜上的褪黑激素受體（MTNR1A和MTNR1B）所介導。其中MTNR1B基因突變與胰島β細胞的功能密切相關(guān),同時基因組關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)MTNR1B基因突變將增加2型糖尿�。═2DM）和妊娠糖尿病（GDM）的風險。在我們前期的臨床調(diào)查過程中發(fā)現(xiàn),西南地區(qū)的孕婦中,MTNR1B基因的單核苷酸多肽性顯著影響著妊娠期間的胰島素釋放水平和血糖濃度。目前褪黑激素在妊娠過程中的對血糖影響的作用機制尚不清楚,本研究在構(gòu)建MTNR1B突變體并選擇雌三醇模擬妊娠環(huán)境的基礎上,觀察褪黑激素對胰島素分泌的影響,期以從褪黑激素、雌激素對胰島素釋放的影響切入為妊娠糖尿病的診治提供新的思路和方向。研究方法:（1）依據(jù)前期在西南地區(qū)收集的2000多例孕婦的MTNR1B外顯子序列與妊娠血糖代謝的分析結(jié)果,課題組篩選并構(gòu)建了3個與妊娠血糖代謝相關(guān)的MTNR1B突變體。分別為71G>A（G24E）、589A>G（S197G）、974... 

【文章來源】：電子科技大學四川省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【圖文】：

圖１－２褪黑激素信號通路??

生長密度達到９０％左右時給予褪黑激素刺激，并設置不同的糖濃度模擬妊娠前期??和后期的血糖濃度變化，以ＤＭＳＯ組作為對照組。詳細處理過程參照３．２．１．２，給??藥處理后收細胞，提取全蛋ＷＢ檢驗結(jié)果如圖２－３所示。??ＭＴＮＲ１Ｂ?ｒ?？一??ＧＡＰＤＨ??圖２－３褪黑激素對ＭＴＮＲ１Ｂ的影響；褪黑激素處理后的目的基Ｈ表達相對于ＤＭＳＯ??組和空．自對照ＭＩＮ６組之間無明凝差異。??２．４討論??本實驗在小鼠胰島細胞系ＭＩＮ６、小鼠脾臟細胞和人乳腺癌細胞系ＭＣＦ７中檢??測內(nèi)源性的ＭＴＮＲ１Ｂ基國的表達情況＜？結(jié)杲顯示在ＭＩＮ６細胞中檢測到內(nèi)源性??ＭＴＮＲ１Ｂ的表達，而在陰性參照小鼠脾臟細胞和ＭＣＦ７細胞中幾乎檢測不到。所??以在后面的實驗中使用ＭＩＮ６細胞系是合理的選擇。繼而將構(gòu)建好的野生型，野生??型的突變表達載體以及窆載轉(zhuǎn)染到ＭＩＮ６細胞中，從實驗結(jié)果來著，我們可以明顯??觀察到轉(zhuǎn)染野生型和突變型的ＭＩＮ６細胞中的目的蛋白表達量明顯增高，說明載??體構(gòu)建成功，且能夠在ＭＩＮ６細胞中表達。在給予褪黑激素刺激后的ＭＩＮ６細胞的??目的基因表達檢測實驗中，我們發(fā)現(xiàn)褪黑激素刺激和外界糖濃度的改變并不會改??變ＭＴＮＲ１Ｂ在細胞中的表達量Ｖ?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ作為一種定性半定量檢測可能是導致??這種結(jié)果的．原因，所以后面的實驗通過Ｅｌｉｓａ定量檢測胰島素的釋放量來觀察褪黑??激素、雌激素等對胰島細胞的影響

?１５Ｍｍ，?２０Ｍｍ，?２５ｍＭ），模擬妊娠期間的血糖濃度變化，通過Ｅｌｉｓａ實驗檢??測胰島素分泌情況，詳細實驗步驟參照３．２．１節(jié)。觀察胰島細胞系中隨著糖濃度不??斷升高后的胰島素釋放情況。結(jié)果如圖３－１所示。??在小鼠胰島細胞系ＮＩＴ－１中，胰島素釋放量隨著外界糖濃度的提高而增多，在??接近２５ｍＭ的糖濃度時達到高峰并趨于平緩；在小鼠細胞系ＭＩＮ６的糖刺激實驗??中，胰島素釋放量伴隨外界糖濃度的增加先有一個胰島素釋放量快速攀升的過程，??在２５ｍＭ糖濃度附近達到最大釋放量并趨于平緩。將兩種細胞系的糖刺激曲線相??比較，ＭＩＮ６細胞在高糖（２５ｍＭ）和低糖（５ｍＭ）的下的胰島素釋放量的差異性??更顯著，ＭＩＮ６細胞的胰島素釋放在糖刺激下趨勢線更明顯。??３１??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]褪黑素受體基因1B單核苷酸多態(tài)性與妊娠糖尿病相關(guān)性研究[J]. 祁娟,胡光明,王婕.  中國醫(yī)藥導報. 2013(03)



本文編號：3019495