目的應(yīng)用RNA干擾技術(shù)構(gòu)建SHP-2基因重組慢病毒載體,研究SHP-2shRNA聯(lián)合苦參堿對宮頸癌Hela細(xì)胞生長增殖的影響。方法靶向構(gòu)建SHP-2的shRNA序列慢病毒載體,將其轉(zhuǎn)染至人宮頸癌Hela細(xì)胞以沉默SHP-2基因,用Real-time PCR（RT-PCR）測定Hela細(xì)胞SHP-2 mRNA,應(yīng)用Western blot法測定SHP-2蛋白表達(dá),CCK8法測定SHP-2基因沉默聯(lián)合苦參堿對Hela細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果設(shè)計(jì)并成功構(gòu)建3組SHP-2基因的干擾序列（SHP-2 shRNA1、SHP-2 shRNA2和SHP-2 shRNA3）以及對照序列（NS）, RT-PCR檢測結(jié)果表明SHP-2 shRNA2慢病毒載體干擾效率最佳。篩選穩(wěn)定細(xì)胞后熒光顯微鏡觀察感染效率較高,Western blot結(jié)果顯示細(xì)胞中SHP-2蛋白表達(dá)明顯被抑制。CCK8提示細(xì)胞的生長增殖能力明顯受限,且隨著時(shí)間延長,聯(lián)合組（SHP-2 shRNA2+苦參堿）增殖最慢,與對照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論成功構(gòu)建出SHP-2基因的shRNA慢病毒干擾系統(tǒng),SHP-2基因沉默... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2020,55(02)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

重組載體 pHBLV-SHP2測序圖譜

包裝有重組慢病毒SHP-2shRNA的293T細(xì)胞 ×100

重組病毒以MOI=10感染HeLa細(xì)胞后的感染效果 ×100

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]苦參堿及氧化苦參堿抑制腫瘤作用機(jī)制研究進(jìn)展及展望[J]. 曹建,魏潤杰,鄧茹蕓,姚樹坤.  中草藥. 2019(03)
[2]FoxM1 shRNA慢病毒載體構(gòu)建及感染人前列腺癌細(xì)胞的穩(wěn)定細(xì)胞株篩選[J]. 王一茹,姚斌偉,張艷,張明博,高菡靜,唐杰.  南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2015(09)
[3]SHP-2酪氨酸磷酸酶野生、突變型真核表達(dá)載體構(gòu)建及其表達(dá)產(chǎn)物磷酸酶活性檢測[J]. 胡中倩,汪心怡,李菲菲,儲著朗,邢小翠,李娟,查欣,瞿成奎,汪思應(yīng).  安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2012(07)



本文編號：2979189