目的使用秀麗隱桿線蟲作為模式生物,觀察rsa基因?qū)bk-2突變型線蟲胚胎發(fā)育和蟲卵孵化的影響,初步探討mbk-2的在胚胎發(fā)育中的作用及機制。方法以RNAi技術(shù)定向干擾mbk-2突變型線蟲rsa基因的表達(dá),并對rsa沉默后線蟲的蟲卵孵化水平及胚胎發(fā)育情況進行分析,檢測其在線蟲生長發(fā)育、生殖能力等方面的變化。結(jié)果與L4440喂養(yǎng)的mbk-2基因突變組相比,rsa-1和rsa-2RNAi細(xì)菌處理mbk-2基因突變組蟲卵未孵化率顯著升高,達(dá)到41.8%和49.2%（P<0.05）,且rsa-2處理組顯著高于rsa-1組（P<0.05）;rsa-1和rsa-2 RNAi細(xì)菌處理的N2野生型線蟲蟲卵未孵化率分別為3.9%和5.7%,顯著低于rsa-1和rsa-2 RNAi細(xì)菌處理的mbk-2突變型線蟲（P<0.05）。rsa-2 RNAi處理mbk-2突變型線蟲組,線蟲胚胎發(fā)育異常顯著增加。結(jié)論 mbk-2是線蟲發(fā)育的一個重要因子,rsa是mbk-2的重要修飾基因,兩者相互作用調(diào)節(jié)線蟲的胚胎發(fā)育和蟲卵孵化。 

【文章來源】：河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2020年10期

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圖4 兩細(xì)胞階段發(fā)育異常情況

在兩細(xì)胞階段,觀察到rsa-2 RNAi喂養(yǎng)的mbk-2突變型線蟲胚胎表現(xiàn)為AB和P1細(xì)胞顯著的不對稱,也表現(xiàn)為細(xì)胞卵裂溝異常,可見于電鏡拍攝圖(圖4)。這種缺陷與rsa-2 RNAi處理的對照N2線蟲相似,這表明胚胎表型的異�？赡軆H由rsa-2的缺失引起。圖4 兩細(xì)胞階段發(fā)育異常情況

采用含rsa-1和rsa-2的RNAi細(xì)菌喂養(yǎng)線蟲,觀察抑制rsa對線蟲孵化率的影響,對照組采用含L4440質(zhì)粒的細(xì)菌喂養(yǎng)。結(jié)果顯示,抑制rsa-1和rsa-2表達(dá)后,蟲卵未孵化率高于對照組(P<0.05)。同時,RNAi篩選結(jié)果顯示,rsa-1和rsa-2可能是mbk-2的增強子,調(diào)控其表達(dá)。為驗證其調(diào)控作用,采用rsa-1和rsa-2的RNAi細(xì)菌喂養(yǎng)mbk-2突變型線蟲。結(jié)果顯示,與N2組相比,mbk-2突變會增加蟲卵的未孵化率。而采用RNAi抑制rsa-1和rsa-2后,mbk-2突變線蟲的蟲卵未孵化率顯著增加,顯著高于mbk-2突變組,見表1。從培養(yǎng)皿的拍攝圖片也可以直觀的看出,使用L4440的對照組,幼蟲的數(shù)量多,孵化率很高。rsa-1和rsa-2喂養(yǎng)的mbk-2突變線蟲,卵子數(shù)量明顯增多,幼蟲數(shù)量減少(圖1～2)。圖2 mbk-2突變線蟲的孵化檢測


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