目的:探索輻射介導下HeLa細胞內(nèi)IER5的生物學功能及IER5與Cdc25B表達的關系。方法:采用4 Gy γ射線分別照射HeLa細胞和siIER5-HeLa細胞,收集照射后0、0.5、2、4、8、12、16、24、36、48h的細胞樣本,并設未照射細胞為對照組。采用Western blot檢測細胞內(nèi)IER5和Cdc25B蛋白的表達;流式細胞術(shù)檢測照射后G2期周期阻滯情況。另外對HeLa細胞分別轉(zhuǎn)染siNC和siIER5,對siIER5-HeLa細胞分別轉(zhuǎn)染IER5過表達質(zhì)粒與空載體質(zhì)粒,然后采用2Gy和4Gy γ射線照射各組細胞,收集照射后0.5、2、4、8、12、24h和對照組細胞樣,通過流式細胞術(shù),qPCR和Western blot檢測細胞內(nèi)G2/M期阻滯及IER5與Cdc25B mRNA和蛋白水平變化。通過生物信息學分析及查閱相關文獻篩選出可能參與IER5調(diào)控Cdc25B基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控因子,通過干擾HeLa細胞內(nèi)IER5的表達后,檢測各轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白水平變化,來初步探索在輻射介導下IER5影響Cdc25B轉(zhuǎn)錄可能的機制。結(jié)果:1.在4Gy劑量輻射介導下HeLa細胞組與siIER... 

【文章來源】：中國疾病預防控制中心北京市

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮略詞表
一、引言
二、材料與方法
    1. 材料
        1.1 細胞
        1.2 siRNA與質(zhì)粒
        1.3 試劑
        1.4 抗體
        1.5 儀器
        1.6 溶液配制
    2. 方法
        2.1 細胞培養(yǎng)
            2.1.1 細胞復蘇
            2.1.2 細胞傳代
            2.1.3 細胞凍存
            2.1.4 細菌培養(yǎng)
            2.1.5 質(zhì)粒提取
            2.1.6 菌種保種
60Coγ射線照射">            2.1.7 ⁶⁰Coγ射線照射
            2.1.8 細胞收集
        2.2 流式細胞術(shù)（Flow Cytometry,FCM）檢測細胞周期
            2.2.1 固定細胞
            2.2.2 清洗細胞
            2.2.3 PI染色
        2.3 實時熒光定量PCR實驗（realtime PCR）
            2.3.1 總RNA提取
            2.3.2 總RNA檢測
            2.3.3 RNA變性
            2.3.4 RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA
            2.3.5 qPCR反應
        2.4 蛋白免疫印跡（Western blot）檢測
            2.4.1 總蛋白提取
            2.4.2 濃度測定與定量
            2.4.3 蛋白變性
            2.4.4 Western blot實驗步驟
        2.5 數(shù)據(jù)分析
            2.5.1 流式周期檢測結(jié)果數(shù)據(jù)處理
            2.5.2 qPCR數(shù)據(jù)處理
            2.5.3 Western blot數(shù)據(jù)處理
三、結(jié)果
    1. 輻射介導下HeLa內(nèi)G2/M期阻滯及IER5與Cdc25B表達情況研究
    2. 輻射介導下HeLa細胞轉(zhuǎn)染siIER5后Cdc25B蛋白表達研究
    3. 輻射介導下siIER5-HeLa細胞轉(zhuǎn)染IER5過表達質(zhì)粒后Cdc25B蛋白表達研究
    4. 參與IER5調(diào)控Cdc25B轉(zhuǎn)錄相關的調(diào)控蛋白的初步篩選與驗證
四、討論
五、結(jié)論
致謝
參考文獻
個人簡介
附錄1
附錄2


【參考文獻】：
期刊論文
[1]輻射介導下HeLa細胞中Cdc25B與IER5蛋白表達的關系[J]. 趙現(xiàn)哲,劉曉丹,周平坤,姜曉燕,丁庫克.  癌變·畸變·突變. 2017(06)
[2]細胞分裂周期蛋白CDC25B抑制劑研究進展[J]. 沈佳匯,陳立,楊天訓,苗冉冉,李亞楠.  中國新藥雜志. 2014(24)
[3]細胞分裂周期蛋白2啟動子報告基因載體的構(gòu)建與鑒定[J]. 周輝,吳煒,趙明.  天津醫(yī)藥. 2014(02)
[4]利用RNA干擾技術(shù)構(gòu)建IER5-SiRNA-Hela細胞系[J]. 李莉,趙煥英,楊川杰,魯葦媛,郝淳,喬茶,周平坤,徐勤芝,丁庫克.  中國實驗診斷學. 2011(01)
[5]IER5基因?qū)eLa細胞輻射敏感性的影響[J]. 李秀楠,李莉,楊川杰,郝淳,喬茶,楊芬,周平坤,王佩,袁增強,李延玲,魯瑋媛,張為遠,丁庫克.  生物化學與生物物理進展. 2009(07)
[6]γ射線照射對IER5基因mRNA表達的影響[J]. 丁庫克,沈晶晶,許莉莉,李延玲,周萍,馬斌榮,趙增強,隋建麗,周平坤.  中華放射醫(yī)學與防護雜志. 2008 (01)

碩士論文
[1]輻射后HepG2細胞IER5與Cdc25B啟動子的相互作用[D]. 楊明月.河北醫(yī)科大學 2014



本文編號：2951022