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低氧環(huán)境下HLA-G對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞生物學(xué)行為的影響

發(fā)布時(shí)間:2020-10-23 09:20
   目的:觀察低氧處理后JEG-3細(xì)胞中HLA-G的m RNA和蛋白水平表達(dá)情況及JEG-3細(xì)胞的生物學(xué)行為;并在體外下調(diào)JEG-3細(xì)胞中HLA-G表達(dá)后,觀察低氧對(duì)JEG-3細(xì)胞生物學(xué)行為的影響;探討HLA-G參與低氧條件下妊娠期高血壓疾病發(fā)生的分子機(jī)制。方法:(1)用q PCR及Western Blot法檢測(cè)低氧處理不同時(shí)間后(H12h、H24h、H48h、H72h)JEG-3細(xì)胞中HLA-G的m RNA及蛋白水平的表達(dá)。(2)利用si RNA技術(shù)體外下調(diào)JEG-3細(xì)胞中HLA-G表達(dá),檢測(cè)低氧處理后JEG-3細(xì)胞中HLA-G的m RNA及蛋白水平表達(dá)。(3)MTT法及Transwell法檢測(cè)各組細(xì)胞增殖活性和侵襲能力。結(jié)果:(1)低氧處理48h和72h后,JEG-3細(xì)胞中HLA-G的mRNA及蛋白表達(dá)水平較常氧對(duì)照組下降,且低氧72h后下降更為明顯,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與常氧對(duì)照組相比,JEG-3細(xì)胞經(jīng)低氧處理后生長(zhǎng)緩慢;MTT結(jié)果顯示,低氧12和24h后,細(xì)胞增殖活性無(wú)明顯改變,而低氧48h及72h后細(xì)胞增殖活性降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與常氧對(duì)照組相比,低氧12、24和48h后,細(xì)胞侵襲能力無(wú)明顯改變,而72h后細(xì)胞侵襲能力減弱,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)在常氧和低氧下,JEG-3細(xì)胞中下調(diào)HLA-G的表達(dá)后,與陰性對(duì)照組相比,轉(zhuǎn)染組細(xì)胞中HLA-G的m RNA及蛋白表達(dá)水平均明顯降低,與常氧轉(zhuǎn)染組相比,低氧轉(zhuǎn)染組中HLA-G的m RNA及蛋白表達(dá)水平也降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);且與陰性對(duì)照組相比,轉(zhuǎn)染組細(xì)胞增殖及侵襲能力均下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與常氧轉(zhuǎn)染組相比,低氧轉(zhuǎn)染組細(xì)胞中細(xì)胞增殖及侵襲能力同樣下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:(1)JEG-3細(xì)胞經(jīng)低氧處理后增殖活性及侵襲能力下降可能與細(xì)胞中HLA-G表達(dá)下降有關(guān)。(2)低氧環(huán)境下HLA-G表達(dá)下降可能通過影響滋養(yǎng)細(xì)胞增殖活性及侵襲能力參與妊娠期高血壓疾病發(fā)生。
【學(xué)位單位】:青海大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位年份】:2018
【中圖分類】:R714.2
【部分圖文】:

溶解曲線,低氧處理


12圖 3.1 HLA-G 的溶解曲線圖h、H24h、H48h、H72h 組 JEG-3 細(xì)胞中 HLA-GmRNA果顯示H12h組與H24h組細(xì)胞中HLA-G mRNA表達(dá)),低氧處理48h及72h后細(xì)胞中HLA-G 的mRNA.05),H72h組較C組HLA-G的 mRNA水平顯著下

蛋白表達(dá),轉(zhuǎn)染,片段


圖3.2 低氧處理不同時(shí)間后JEG-3細(xì)胞中HLA-G的蛋白表達(dá)注:A.Western blot檢測(cè)常氧及低氧條件下JEG-3細(xì)胞HLA-G蛋白表達(dá)的原始條帶;B.蛋白條帶的分析結(jié)果;*表示與C組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),#表示與C組比較P<0.01。3.2.2 細(xì)胞經(jīng) siRNA 轉(zhuǎn)染后 HLA-G 蛋白相對(duì)表達(dá)量Si1、Si2、Si3片段轉(zhuǎn)染JEG-3細(xì)胞后HLA-G蛋白表達(dá)較Blank control組均下降(P<0.05)(如圖3.3),表達(dá)抑制率分別為(39.037±0.2625)%、(61.814±2.214)%、(60.847±1.798)%。Si2片段抑制HLA-G在蛋白水平表達(dá)效果最好,與qPCR結(jié)果一致,后續(xù)實(shí)驗(yàn)用Si2片段進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

低氧處理,蛋白表達(dá),轉(zhuǎn)染,蛋白


15圖3.2 低氧處理不同時(shí)間后JEG-3細(xì)胞中HLA-G的蛋白表達(dá)注:A.Western blot檢測(cè)常氧及低氧條件下JEG-3細(xì)胞HLA-G蛋白表達(dá)的原始條帶;B.蛋白條帶的分析結(jié)果;*表示與C組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),#表示與C組比較P<0.01。3.2.2 細(xì)胞經(jīng) siRNA 轉(zhuǎn)染后 HLA-G 蛋白相對(duì)表達(dá)量Si1、Si2、Si3片段轉(zhuǎn)染JEG-3細(xì)胞后HLA-G蛋白表達(dá)較Blank control組均下降(P<0.05)(如圖3.3),表達(dá)抑制率分別為(39.037±0.2625)%、(61.814±2.214)%、(60.847±1.798)%。Si2片段抑制HLA-G在蛋白水平表達(dá)效果最好,與qPCR結(jié)果一致,后續(xù)實(shí)驗(yàn)用Si2片段進(jìn)行轉(zhuǎn)染。圖3.3 Western blot檢測(cè)siRNA轉(zhuǎn)染JEG-3細(xì)胞后HLA-G蛋白表
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