研究背景:卵巢癌(Ovarian cancer,OC)最主要的轉(zhuǎn)移途徑是種植性轉(zhuǎn)移。粘附性改變是腫瘤轉(zhuǎn)移的一個關(guān)鍵環(huán)節(jié)。粘附分子CADM(Cell adhesion molecule,CADM)是位于細胞表面的糖蛋白,通過鈣非依賴性同源反式相互作用介導(dǎo)細胞間粘附,過表達CADM1可抑制細胞生長因子誘導(dǎo)的EMT,而CADM1功能的喪失可導(dǎo)致上皮來源的癌細胞侵襲和/或轉(zhuǎn)移。CADM1是否參與卵巢癌的發(fā)生發(fā)展,對卵巢癌細胞的生物學(xué)行為有無影響,CADM1如何發(fā)揮抑癌作用,其上下游調(diào)控的機制如何,目前鮮有報道。目的:本研究通過檢測卵巢腫瘤組織標本CADM1的表達分布、分析過表達與沉默表達CADM1的卵巢癌細胞株細胞生物學(xué)行為的改變、分析卵巢癌細胞株CADM1過表達后差異的基因表達譜,從腫瘤臨床病理學(xué)、細胞行為學(xué)和基因表達等角度,探討CADM1如何影響卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的機制。初步闡明CADM1在卵巢上皮性腫瘤中的表達分布及及其臨床價值;CADM1對卵巢癌細胞增殖、凋亡及轉(zhuǎn)移的影響,尋找CADM1的抑癌機制,篩選其抑癌通路,為今后參與癌細胞調(diào)控,探索新的抑癌途徑提供理論依據(jù)。方法:(1)收集不同類型卵巢腫瘤組織標本132例,通過免疫組化檢測CADM1在卵巢癌、交界性腫瘤、良性腫瘤中的的表達,Western bloting檢測腫瘤組織CADM1、MPP6、MMP2、MMP9等蛋白的表達,探討這些因子與卵巢腫瘤的發(fā)病、病理、臨床指標的關(guān)系。(2)構(gòu)建CADM1過表達和沉默表達的慢病毒載體,分別感染ES-2和HO-8910卵巢癌細胞株,通過CCK-8檢測細胞增殖、流式細胞儀檢測細胞凋亡、Transwell實驗和細胞劃痕實驗檢測細胞遷移,探討CADM1的功能及對卵巢癌細胞的影響。(3)通過高通量表達芯片技術(shù)檢測CADM1過表達ES-2細胞的基因表達譜,分析與CADM1相關(guān)的上調(diào)或下調(diào)基因及相關(guān)通路,探討CADM1調(diào)控細胞的機制。結(jié)果:(1)免疫組化法檢測CADM1在卵巢上皮性癌中的陽性表達率(74例,37.25%)明顯低于卵巢良性腫瘤(34例,82.34%)和卵巢交界性腫瘤(24例,79.11%),各組間存在顯著性差異(P0.001)。(2)卵巢癌組織CADM1與MPP6蛋白的表達較良性與交界性卵巢上皮性腫瘤組織明顯降低(P0.01);而MMP2、MMP9蛋白在卵巢惡性腫瘤組織的表達高于卵巢良性與交界性腫瘤組織(P0.05)。(3)構(gòu)建CADM1過表達及沉默表達(RNAi)的慢病毒載體。過表達CADM1ES-2細胞株與對照組相比,其細胞凋亡增加(P0.05),細胞活性、細胞克隆數(shù)和遷徙能力降低(P0.05),細胞的侵襲能力明顯降低(P0.01)。說明過表達CADM1可以抑制腫瘤細胞。沉默表達CADM1的HO-8910細胞株與對照組相比,其細胞活性增高(P0.05),細胞克隆數(shù)、細胞轉(zhuǎn)移數(shù)和24h細胞遷移率均高于對照組(P0.05)。(4)高通量mRNA芯片技術(shù)發(fā)現(xiàn),CADM1過表達ES-2細胞有84個基因表達明顯上調(diào),46個基因表達明顯下調(diào);其中與CADM1相關(guān)的C4BPA、IFI44L、TGFBI、RCN3等基因顯著上調(diào),APP、EDN1、FXYD2、IGF1和Rap1A等基因明顯下調(diào),LXR/RXR Activation通路被顯著激活。結(jié)論:(1)CADM1在卵巢癌中的表達低于卵巢良性腫瘤和卵巢交界瘤,說明CADM1能夠反映卵巢腫瘤的良惡性程度,與腫瘤的惡性進展有關(guān)。(2)CADM1在卵巢癌細胞過表達和沉默表達時,明顯影響卵巢癌細胞的生物學(xué)行為,說明CADM1是個有功能的抑癌基因,能夠抑制卵巢癌細胞的增殖和遷移能力。(3)當CADM1在卵巢癌細胞過表達時,能夠促進84個基因表達上調(diào),46個基因表達下調(diào)。CADM1對卵巢癌影響的機制可能與其上調(diào)C4BPA、IFI44L、TGFBI的表達及激活LXR/RXR通路,從而導(dǎo)致下游PI3K/Akt/mTOR信號通路的激活被抑制,從而反饋上調(diào)TGFBI的表達和激活ROS/JNK通路,誘導(dǎo)卵巢癌細胞凋亡,并抑制卵巢癌的增殖和轉(zhuǎn)移。
【學(xué)位單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R737.31
【部分圖文】：

文 CADM1 對卵巢腫瘤的卵巢癌病例數(shù)（44 例），顯著高于卵巢癌組織 C，二者比較有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。卵巢癌病病例數(shù)之間沒有統(tǒng)計學(xué)差異（P≥0.05）。ADM1 表達的比較，卵巢良性腫瘤和卵巢交界性腫瘤的 CADM1 的較低。卵巢良性腫瘤和卵巢交界性腫瘤 CADM1 的.11%，都明顯高于卵巢癌（37.25%）（P<0.001）

CADM1 在卵巢腫瘤組織中的表達陽性率。（卵巢良性腫瘤：BEOT，卵巢交瘤：BOT，卵巢癌：OC；***P<0.001）。ure 2-1 The positive rate of CADM1 expression in ovarian tumor tissues. (benign otumor: BENT, borderline ovarian tumor: BOT, ovarian cancer: OC; ***P<0.001)卵巢腫瘤組織 CADM1、MPP6、MMP2、MMP9 蛋白的表達過 Western bloting 檢測了卵巢良性腫瘤、卵巢交界瘤和卵巢1、MPP6、MMP2、MMP9 蛋白的表達。CADM1 蛋白在卵巢良性達最高（P<0.01），在卵巢癌組織中表達最低（P<0.001）（圖 ；卵巢交界瘤 CADM1 蛋白的表達介于二者之間。MPP6 在卵巢良性達最高（P<0.05），在卵巢癌組織中表達最低（P<0.05）（圖 2-3，圖界瘤 MPP6 蛋白的表達介于二者之間。 MMP2 在卵巢癌腫瘤組織P<0.05），在卵巢良性腫瘤組織中表達最低（P<0.05）（圖 2-3，圖界瘤 MMP2 蛋白的表達介于二者之間。MMP9 在卵巢癌組織中表0.05），在卵巢良性腫瘤組織中表達最低（P<0.05）（圖 2-3，圖 2-7

M1、MPP6、MMP2、MMP9 蛋白在卵巢腫瘤組織中的 western（卵巢良性腫瘤：BEOT，卵巢交界性腫瘤：BOT，卵巢癌：Ostern bloting cataphoresis map of CADM1，MPP6，MPP2，MPP9 pbenign ovarian tumor: BEOT，borderline ovarian tumor: BOT，ova

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本文編號：2813547