目的:1)評估生長激素預處理在卵巢低反應患者體外受精中應用效果;2)體外研究探討生長激素對低反應顆粒細胞及線粒體膜電位影響。方法:本研究分為兩個部分,第一部分回顧性分析2017年4月到2018年10月在我中心就診的136例患者,均診斷為卵巢低反應。按照其使用生長激素治療的給藥方法和用藥時機將研究分組間對照和自身對照。其中組間對照107人,應用生長激素預處理組(Gn啟動前應用約4周的GH治療,n=58)與非預處理組(Gn啟動開始間斷予以GH治療,n=49),自身對照29人,移植或取卵失敗后應用生長激素預處理(Gn啟動前連續(xù)應用約4周的GH治療);組間對照比較Gn使用總量、使用天數(shù)、獲卵數(shù)、胚胎數(shù)、優(yōu)質胚胎數(shù)、種植率、生化妊娠率及臨床妊娠率,自身對照比較GH預處理前后Gn使用總量、使用天數(shù)、獲卵數(shù)、胚胎數(shù)、優(yōu)質胚胎數(shù)、種植率、生化妊娠數(shù)及臨床妊娠數(shù)。第二部分,體外研究GH對低反應顆粒細胞及線粒體膜電位影響。用5mg/L順鉑處理來塑造低反應顆粒細胞模型;研究對象分為三組,新鮮組(即培養(yǎng)后的顆粒細胞)、低反應組(用5mg/L順鉑處理24小時后的顆粒細胞)、GH處理組(用5mg/L順鉑處理24小時后的的低反應顆粒細胞再加用生長激素處理48小時后);分別先用光學顯微鏡觀察顆粒細胞數(shù)量及形態(tài)變化后用JC-1/PI染色液染色,用共聚焦顯微鏡觀察顆粒細胞線粒體形態(tài)變化并組間比較線粒體膜電位的差異。結果:第一部分:(1)組間對照中預處理組Gn的使用總量(2031.03±945.55)和使用天數(shù)(8.93±2.53)明顯少于非預處理組Gn的使用總量(3578.24±1277.56)和使用天數(shù)(11.63±3.04),其胚胎數(shù)(2.38±1.75)、優(yōu)質胚胎數(shù)(1.79±1.41)、移植率(36.14%)、生化妊娠率(55.17%)、臨床妊娠率(48.28%)明顯高于非預處理組的胚胎數(shù)(1.76±1.01)、優(yōu)質胚胎數(shù)(1.14±1.14)、移植率(18.97%)、生化妊娠率(24.49%)、臨床妊娠率(18.37%),差異均有顯著統(tǒng)計學意義(P0.05);但其獲卵數(shù)(4.98±3.10)與非預處理組的(4.67±1.95)差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。(2)自身對照組應用生長激素預處理后比較之前不但Gn的使用天數(shù)(-1±2.66)與總量(-317±872.6)減少,而且獲卵數(shù)(2.17±2.07)、胚胎數(shù)(1.41±1.70)、優(yōu)質胚胎數(shù)(1.31±1.23)、移植率(0%VS 33.33%)、生化妊娠數(shù)(1 VS 16)、臨床妊娠數(shù)(0 VS 14)均升高,差異有顯著統(tǒng)計學意義(P0.05)。第二部分:首先通過光學顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)5mg/L順鉑處理后的顆粒細胞數(shù)量明顯減少伴有形態(tài)改變,而后通過GH干預后其數(shù)量又明顯增加伴形態(tài)恢復。接下來從二個方面觀察GH的作用:㈠顆粒細胞線粒體形態(tài)方面,GH組線粒體體積雖較新鮮組稍增大,但較低反應組明顯縮小,其基質密度較低反應組明顯升高、界限也較低反應組更清晰。㈡顆粒細胞線粒體膜電位方面,5mg/L順鉑處理后的低反應組的顆粒細胞線粒體膜電位值較新鮮理組的明顯減少,差異有顯著統(tǒng)計學意義(P0.05);GH處理組的顆粒細胞線粒體膜電位值較低反應組的明顯升高,差異有顯著統(tǒng)計學意義(P0.05);GH處理組的顆粒細胞線粒體膜電位值小于新鮮組的顆粒細胞線粒體膜電位值,但差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論:1)生長激素預處理可明顯提高POR患者體外受精的臨床結局,并明顯減少Gn的使用總量和天數(shù)。2)GH可改善顆粒細胞功能,增加低反應顆粒細胞線粒體的膜電位值。
【學位單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R714.8
【部分圖文】：

先光學顯微鏡下可明顯看出 5mg/L 順鉑處理后的顆粒細胞數(shù)量上明顯減態(tài)發(fā)生改變；后經過生長激素干預處理后發(fā)現(xiàn)其顆粒細胞數(shù)量明顯增多，也明顯恢復，與新鮮組差異不大。其次，通過共聚焦顯微鏡下染色可以看處理后線粒體體積腫脹、基質密度低。具體詳見圖 1。新鮮組 5mg/L 順鉑處理 GH 組

圖 2 .新鮮組、低反應組及 GH 處理組的顆粒細胞線粒體熒光染色對比3.2.2 線粒體膜電位結果激光共聚焦顯微鏡定性觀察顯示：與新鮮組相比，低反應組紅色熒光(JC-1聚合體)／綠色熒光(JC-1 單體)明顯下降，提示低反應組膜電位呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢，聚集體/單體比值差異有顯著統(tǒng)計學意義（P<0.05），說明 5mg/L 順鉑制造的顆粒細胞低反應模型很成功。與低反應組相比，GH 處理組紅色熒光(JC-1 聚合體)／綠色熒光(JC-1 單體)明顯升高，聚集體/單體比值差異有顯著統(tǒng)計學意義（P<0.05），說明 GH 處理組膜電位呈現(xiàn)恢復的趨勢。與新鮮組相比，GH 組紅色熒光(JC-1 聚合體)／綠色熒光(JC-1 單體)略降低，聚集體/單體比值差異無顯著統(tǒng)計學意義（P>0.05），說明 GH 處理后線粒體膜電位恢復良好，GH 對低反應顆粒細胞治療有效。具體詳見表 4，表 5 及圖 3。

安徽醫(yī)科大學碩士學位論文表 4 完全隨機設計方差分析表變異來源 SS df MS F P處理組間 1.2374 2 0.6187 8.3863 <0.01組內（誤差） 1.3279 18 0.0738總 2.5653 20表 5 SNK 法 q 檢驗計算表對比組 兩均數(shù)之差 差的標準誤 q 值 組數(shù) a P新鮮組與低反應組 0.6007 0.1037 5.7903 3 <0.01新鮮組與生長激素處理組 0.2598 0.0994 2.6132 2 ＞0.05生長激素處理組與低反應組 0.3409 0.1069 3.1898 2 0.01~0.05圖 3.三組之間的差異比較

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本文編號：2813353