【摘要】：研究目的:本課題利用采用小分子藥物、非編碼RNA序列及多組學(xué)方法,探索卵巢癌發(fā)展的相關(guān)調(diào)控因素,并根據(jù)TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)的信息,對(duì)漿液性卵巢癌進(jìn)行多組學(xué)分析,探索卵巢癌的調(diào)控機(jī)制、凋亡相關(guān)因素其核心目的是找到一種新的診斷和治療方法,可以優(yōu)化卵巢癌,這對(duì)更多的卵巢癌患者有益。研究方法①使用Arctigenin對(duì)上皮卵巢癌細(xì)胞系OVCAR3和SKOV3進(jìn)行抑制實(shí)驗(yàn)。用Ac-DEVD-CHO預(yù)處理卵巢癌細(xì)胞抑制了 caspase-3活性。轉(zhuǎn)染空載體或pcDNA3.1-Survivin的質(zhì)粒。使用Arctigenin直接干預(yù)所研究的細(xì)胞并使用穩(wěn)定而可靠的細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒分析細(xì)胞凋亡。Western blotting和ECL化學(xué)發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)免疫反應(yīng)性復(fù)合物的結(jié)合;②利用成熟的實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-qPCR)用于檢測(cè)卵巢癌組織樣本中DARS-AS1的表達(dá)的程度。檢測(cè)DARS-AS1對(duì)卵巢癌增殖和轉(zhuǎn)移的影響,通過熒光素酶測(cè)定和RNA免疫沉淀(RIP)對(duì)潛在機(jī)制進(jìn)行探索;③根據(jù)公共數(shù)據(jù)庫(kù)的599例漿液性卵巢癌患者的1203個(gè)樣品的DNA甲基化、蛋白質(zhì)、microRNA和基因表達(dá)情況采用無監(jiān)督分類算法進(jìn)行分類,依據(jù)RNA-seq數(shù)據(jù)分成9個(gè)亞型,再將亞型與預(yù)后以及臨床因素之間進(jìn)行關(guān)聯(lián)評(píng)估,并對(duì)基于不同組學(xué)數(shù)據(jù)整合的亞型進(jìn)行關(guān)聯(lián)性評(píng)估。研究結(jié)果①基礎(chǔ)狀態(tài)時(shí)卵巢癌細(xì)胞存在iNOS高表達(dá)。與對(duì)照組相比,Arctigenin治療組中iNOS的表達(dá)水平比基線低2至4倍。與化學(xué)NO供體共孵育時(shí),由Arctigenin誘導(dǎo)的STAT3磷酸化和Survivin表達(dá)受抑現(xiàn)象被逆轉(zhuǎn);外源性NO的加入可拮抗牛蒡子素誘導(dǎo)的卵巢癌細(xì)胞凋亡。②DARS-AS1在卵巢癌組織中的表達(dá)顯著高于癌旁組織。當(dāng)DARS-AS1在卵巢癌細(xì)胞中沉默時(shí),細(xì)胞增殖受到抑制,細(xì)胞遷移和侵襲能力也受到抑制。microRNA-532-3p是DARS-AS1在卵巢癌中的直接靶標(biāo)。敲除DARS-AS1后,miR-532-3p表達(dá)上調(diào)。③(1)基于RNA-seq結(jié)果將SOC分為九個(gè)亞型,相關(guān)基因主要在以下四個(gè)生物學(xué)行為過程中聚集:免疫活性、激素代謝、間充質(zhì)發(fā)育和MAPK信號(hào)傳導(dǎo)過程中(2)基于DNA甲基化、蛋白質(zhì)和microRNA表達(dá)水平的結(jié)果根據(jù)甲基化差異分成四種亞型,根據(jù)蛋白質(zhì)陣列分成兩個(gè)聚類的NMF模型;根據(jù)microRNA表達(dá)水平發(fā)現(xiàn)六組高表達(dá)microRNA。(3)基于綜合通路確定了四個(gè)聚類的PAM模型。結(jié)果表明基于一個(gè)組學(xué)的數(shù)據(jù)集的亞型無法完全替代其他組學(xué)的數(shù)據(jù)。結(jié)論①Arctigenin可抑制卵巢癌細(xì)胞增殖。其作用機(jī)制是該藥物通過STAT3/Survivin信號(hào)系統(tǒng)誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞中caspase-3依賴性細(xì)胞凋亡;②DARS-AS1通過捕捉卵巢癌miR-532-3p增強(qiáng)細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移;③多組學(xué)的研究結(jié)果表明:基于一個(gè)組學(xué)的數(shù)據(jù)集的亞型無法完全替代其他組學(xué)的數(shù)據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R737.31
【圖文】：

為了驗(yàn)證Ａｒｃｔｉｇｅｎｉｎ誘導(dǎo)的０ＶＣＡＲ３和ＳＫ０Ｖ３細(xì)胞增殖抑制是否因凋亡逡逑誘導(dǎo)所致，所以使用ａｎｎｅｘｉｎ－Ｖ結(jié)合試驗(yàn)用于評(píng)估用Ａｒｃｔｉｇｅｎｉｎ處理的卵巢逡逑癌細(xì)胞０ＶＣＡＲ３和ＳＫ０Ｖ３的細(xì)胞凋亡。如圖２邋Ａ所示，０ＶＣＡＲ３細(xì)胞添加逡逑Ａｒｃｔｉｇｅｎｉｎ后，使ａｎｎｅｘｉｎ－邋Ｖ＋凋亡百分比增加４倍，ＳＫ０Ｖ３細(xì)胞凋亡百分逡逑比增加６倍（相對(duì)于未處理的對(duì)照組，ｐ［０．邋０５）。邋Ｗｅｓｔｅｒｎ印跡分析的結(jié)果進(jìn)逡逑—步證實(shí)了與未處理對(duì)照相比給予Ａｒｃｔｉｇｅｎｉｎ。邋卵巢癌０ＶＣＡＲ３和ＳＫ０Ｖ３逡逑細(xì)胞中ｃａｓｐａｓｅ－３裂解顯著增加（圖２邋Ｂ）。邐為了證明ｃａｓｔｉａｓｅ－３激活參與逡逑牛蒡子素誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，采用Ａｃ－邋ＤＥＶＤ－邋ＣＨ０對(duì)卵巢癌０ＶＣＡＲ３和ＳＫ０Ｖ３細(xì)逡逑胞進(jìn)行２小時(shí)的預(yù)處理，然后給予Ａｒｃｔｉｇｅｎｉｎ。最終成效非常明顯，用Ａｃ－逡逑ＤＥＶＤ－ＣＨ０預(yù)處理的卵巢癌０ＶＣＡＲ３和ＳＫ０Ｖ３細(xì)胞系，其Ａｒｃｔｉｇｅｎｉｎ誘導(dǎo)的逡逑細(xì)胞凋亡過程均被阻斷（圖２邋Ｃ）。逡逑－６０－逡逑

為了確定Ａｒｃｔｉｇｅｎｉｎ對(duì)ＳＴＡＴ３激活的影響作用，我們使用蛋白質(zhì)印跡分析逡逑檢測(cè)了邋ＳＴＡＴ３的枺酸化水平。結(jié)果顯示，與未給予Ａｒｃｔｉｇｅｎｉｎ的對(duì)照組相比，逡逑Ａｒｃｔｉｇｅｎｉｎ抑制殘基Ｙ７０５處ＳＴＡＴ３的枺酸化（圖３Ａ）。給予Ａｒｃｔｉｇｅｎｉｎ處理逡逑后，Ｓｕｒｖｉｖｉｎ的蛋白濃度持續(xù)降低（圖３Ｂ）。隨后，我們檢測(cè)了邋ＳＴＡＴ３／Ｓｕｒｖｉｖｉｎ逡逑信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)的失活是否因Ａｉｘｔ邋ｉｇｅｎｉｎ誘導(dǎo)的０ＶＣＡＲ３和ＳＫ０Ｖ３細(xì)胞凋亡所致。逡逑如圖３Ｃ所示，使用表達(dá)Ｓｕｒｖｉｖｉｎ質(zhì)粒進(jìn)行預(yù)轉(zhuǎn)染明顯（ｐ邋＜０．０５）阻斷了給予逡逑Ａｒｃｔｉｇｅｎｉｎ后引起的卵巢癌０ＶＣＡＲ３和ＳＫ０Ｖ３細(xì)胞的凋亡過程。逡逑Ａ邐ＯＶＣＡＲ３邐ＳＫＯＶ３邐＾邐１邐＿0ＶＣＡＲ３逡逑…邋＂邋丨．；邐ｒ—邋邐邋卜邐，邐Ｏ邋ＳＫＷ３逡逑ＣｗＷ邐Ｃｏｎｔｒｏｌ邋Ａｒｒｎｇｍｍ邋＜邐ｆ邋！逡逑，ｓｗａｃ＾ｎ［＾ｒ｜邐Ｉ邐１＇邐■邋■逡逑邐邐邋＾邋°－ｓ，邋Ｉ邋．邐！邋＊逡逑ＳＴＡＴ３邋ｍｍｍ邋ｍｗｍ邋ｍｍｍｍ邋ｍｕｍ邐ｍ邐ｆ邐ｍＩＭ邋１逡逑邐邐ｔ邐邐邐邋眾邋ｑ邋ｉ－ｊｍ—．．．：，．、ｕｒｍ一．＿＊逡逑Ｃｏｎｔｒｏｌ邋Ａｒｃｔｉｇｅｎｉｎ逡逑Ｂ邐0

本文編號(hào)：2799695