【摘要】：目的:上皮型卵巢癌是女性常見的惡性腫瘤之一。由于缺乏有效的篩查方法,60-90%的患者發(fā)現(xiàn)時已發(fā)展至晚期。卵巢癌的進展與免疫系統(tǒng)密切相關。腫瘤相關巨噬細胞作為腫瘤微環(huán)境的重要組成部分,對卵巢癌的進展起著重要作用。現(xiàn)有的研究發(fā)現(xiàn)活性維生素D可以改變腫瘤相關巨噬細胞的極化方向。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)活性維生素D可以抑制卵巢癌的發(fā)展。為了研究活性維生素D是否可以通過改變腫瘤相關巨噬細胞的極化,影響卵巢癌的進展,本研究使用活性維生素D處理M1型、M2型腫瘤相關巨噬細胞,并用它們的上清液(即條件培養(yǎng)基)培養(yǎng)卵巢癌細胞。通過體內、體外實驗觀察活性維生素D刺激巨噬細胞獲得的條件培養(yǎng)基是否會對卵巢癌細胞的生物學特性產生影響。初步探討活性維生素D作用于腫瘤相關巨噬細胞后影響卵巢腫瘤細胞特性的可能機制,為活性維生素D用于卵巢癌防治提供可靠的實驗數(shù)據。方法:(1)通過循證醫(yī)學的方法證明腫瘤相關巨噬細胞在卵巢癌病人腫瘤組織中浸潤的密度與患者預后是否存在相關性:通過“卵巢癌”、“巨噬細胞”、“腫瘤相關巨噬細胞”等關鍵詞在PubMed與MEDLINE數(shù)據庫中檢索相關文獻,收集腫瘤相關巨噬細胞浸潤密度與患者預后的風險比(Hazard Risk,HR)。通過meta-analysis分析腫瘤相關巨噬細胞在腫瘤組織中浸潤的陽性率與卵巢癌患者預后的關系。計算合并后的HR以及95%置信區(qū)間(Confidence Interval,CI)。(2)活性維生素D通過腫瘤相關巨噬細胞對卵巢癌細胞生物學特性的影響:使用流式細胞分析儀檢測體外極化的M1型、M2型腫瘤相關巨噬細胞標志物。用活性維生素D刺激M1型、M2型腫瘤相關巨噬細胞,收集條件培養(yǎng)基,用腫瘤相關巨噬細胞的條件培養(yǎng)基培養(yǎng)卵巢癌細胞。使用CCK-8法檢測卵巢癌細胞的活性;使用平板克隆實驗檢測卵巢癌細胞增殖能力的變化;使用劃痕與Transwell實驗檢測卵巢癌細胞遷移能力的變化。將腫瘤相關巨噬細胞與熒光標記的卵巢癌細胞接種于裸鼠皮下,觀察其致瘤能力的變化,以及小鼠生存期的變化。從體內、體外實驗說明活性維生素D是否通過腫瘤相關巨噬細胞對卵巢癌細胞生物學特性產生影響。(3)活性維生素D通過腫瘤相關巨噬細胞影響卵巢癌細胞生物學特性的機制:用ELISA法檢測活性維生素D處理腫瘤相關巨噬細胞得到的條件培養(yǎng)基,檢測TGF-β1、TNF-α、IL-1β、MMP-9含量變化;收取不同巨噬細胞蛋白樣品,通過western blot法,檢測活性維生素D處理后巨噬細胞VDR表達水平的變化;檢測不同條件培養(yǎng)基培養(yǎng)的卵巢癌細胞中EGFR、β-catenin表達水平的變化,進一步闡明活性維生素D通過腫瘤相關巨噬細胞對卵巢癌細胞生物學特性產生影響的可能機制。結果:(1)卵巢癌組織中M2型腫瘤相關巨噬細胞是卵巢癌病人預后的危險因素最終納入文獻8篇,合并病例961例。結果顯示腫瘤相關巨噬細胞陽性率可以引起卵巢癌病人的不良預后(HR 1.78,95%CI 1.19~2.66)。由于結果的異質性較大,所以我們進行了亞組分析與敏感性分析。亞組分析結果發(fā)現(xiàn),M2型腫瘤相關巨噬細胞在腫瘤組織中的陽性率與病人不良預后呈正相關。敏感性分析結果發(fā)現(xiàn),剔除其中一篇文獻后,分析結果的異質性明顯下降。(2)活性維生素D刺激M2型腫瘤相關巨噬細胞的條件培養(yǎng)基可以降低卵巢癌細胞的增殖與遷移能力細胞活性實驗結果顯示,活性維生素D刺激M1型細胞得到的條件培養(yǎng)基可以促進SKOV-3細胞的增殖,而活性維生素D刺激M2型細胞得到的條件培養(yǎng)基培養(yǎng)的SKOV-3細胞的活性卻被抑制了。平板克隆實驗結果顯示,活性維生素D對M1型巨噬細胞培養(yǎng)基刺激的卵巢癌細胞增殖能力無影響(p0.05)。但是,活性維生素D可以通過影響M2型巨噬細胞的培養(yǎng)基降低卵巢癌細胞的增值能力(p0.05)。劃痕實驗結果顯示,用活性維生素D刺激M1型巨噬細胞得到的條件培養(yǎng)基可以促進卵巢癌細胞遷移能力,并且遷移能力隨時間延長而增加,在48小時時達到最大值(p0.05)。而用活性維生素D刺激M2型巨噬細胞得到的條件培養(yǎng)基在不同時間均抑制卵巢癌細胞的遷移能力(p0.05)。裸鼠成瘤實驗結果顯示,活性維生素D刺激的巨噬細胞與卵巢癌細胞共同接種裸鼠皮下、且每周肌肉注射維生素D_3,生存率較對照組顯著提高。以上體內、體外實驗結果說明,活性維生素D可以通過改變M2型腫瘤相關巨噬細胞的培養(yǎng)基,降低卵巢癌細胞的增殖與遷移能力(3)活性維生素D通過與腫瘤相關巨噬細胞的VDR結合,間接地影響了卵巢癌細胞蛋白表達Western blot結果顯示活性維生素D可以調節(jié)M2型巨噬細胞VDR的表達,進而降低巨噬細胞TGF-β1、MMP-9、TNF-α,增加IL-1β的分泌。同時,活性維生素D刺激M2型巨噬細胞的條件培養(yǎng)基可以抑制卵巢癌細胞β-catenin的表達量,最終抑制卵巢癌細胞的增殖與遷移能力。說明活性維生素D的條件培養(yǎng)基抑制卵巢癌細胞的增殖與遷移,與增加M2型巨噬細胞VDR表達、減少TGF-β1、MMP-9、TNF-α,增加IL-1β的表達有關。以上實驗結果說明,活性維生素D可以通過調節(jié)M2型腫瘤相關巨噬細胞的蛋白分泌,改變卵巢癌細胞的生物學特性。結論:(1)腫瘤組織M2型腫瘤相關巨噬細胞陽性率是卵巢癌病人預后的危險因素;(2)活性維生素D處理M2型腫瘤相關巨噬細胞后,可以降低卵巢癌細胞的增殖與遷移能力;并提高裸鼠的生存時間;(3)活性維生素D通過與腫瘤相關巨噬細胞VDR結合,降低TGF-β1、TNF-α、MMP-9的表達,促進IL-1β的表達,間接地影響了卵巢癌細胞β-catenin的表達,抑制了卵巢癌細胞的生物學特性。
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R737.31
【圖文】：

腫瘤相關巨噬細胞與卵巢癌病人預后的meta-analysis森林圖

圖 1.2 M2 型腫瘤相關巨噬細胞與卵巢癌病人預后的亞組分析森林圖2.5 敏感性分析為了尋找導致 meta 主分析異質性的文獻，我們又進行了敏感性分析，即將

圖 2.1 PMA 對 THP-1 細胞形態(tài)以及標志物的影響THP-1 細胞經 PMA 刺激，A: 細胞形態(tài)直觀圖，細胞貼壁生長，形態(tài)接近“卵圓形”；B: PMA 刺激后，巨噬細胞標志物 CD68 表達上升。為了觀察維生素 D 是否影響 M1 型和 M2 型巨噬細胞表面標志物的表達情況，

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 巢汝;黃靚;屈順林;張弛;;巨噬細胞能量代謝與動脈粥樣硬化[J];生命的化學;2018年03期

2 崔凡;穰真;王有為;楊戈;;AIDS患者巨噬細胞對白念珠菌的吞噬和滅活功能研究[J];中國麻風皮膚病雜志;2017年04期

3 孟董超;王東;宋娟;盧彥珍;;巨噬細胞極化在冠狀動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展中的作用研究進展[J];長治醫(yī)學院學報;2017年02期

4 李雪巖;楊玉玉;陳君;;中藥抗巨噬細胞泡沫化的研究進展[J];藥學與臨床研究;2017年05期

5 袁鋒;尚茹茹;張錦;溫婷;李愛萍;劉曉紅;;巨噬細胞極化與動脈粥樣硬化[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2015年22期

6 高雙英;吳靜;楊貴麗;;結腸癌腫瘤相關巨噬細胞的浸潤和MMP-2的表達、血管生成關系的研究[J];中國免疫學雜志;2016年03期

7 龔立博;索艷榮;王學嶺;郭茂娟;;基于巨噬細胞亞型分化探討中醫(yī)藥防治動脈粥樣硬化的研究進展囿[J];中國中醫(yī)基礎醫(yī)學雜志;2016年05期

8 侯亮;路英進;丁彥春;;養(yǎng)心氏對巨噬細胞極化及活化的調節(jié)[J];中西醫(yī)結合心腦血管病雜志;2016年15期

9 趙清杰;朱琳楠;丁文軍;趙勇;;巨噬細胞極化與細胞代謝的相互調控[J];細胞與分子免疫學雜志;2015年03期

10 田媛;劉起會;朱迅;閆東梅;;巨噬細胞極化信號通路及其調控機制研究進展[J];現(xiàn)代免疫學;2015年05期

相關會議論文 前10條

1 姚芳苡;黃自坤;傅穎媛;;人巨噬細胞極化相關長鏈非編碼RNA表達譜篩選及研究[A];第十二屆全國免疫學學術大會摘要匯編[C];2017年

2 李枋;霏李杰;;扶正解毒方對共培養(yǎng)體系下腫瘤相關巨噬細胞表型變化影響的實驗研究[A];第一屆青年中西醫(yī)結合腫瘤學術論壇論文集[C];2015年

3 白力;張文蘭;竇晶莉;王永福;;組蛋白修飾與巨噬細胞極化的關系[A];第十屆全國免疫學學術大會匯編[C];2015年

4 史玉玲;王又明;豐美福;;巨噬細胞激活作用的研究[A];中國細胞生物學學會第五次會議論文摘要匯編[C];1992年

5 閆昭雨;韓馨怡;王卓;侯琦;李勇莉;;鐵代謝對腫瘤相關巨噬細胞表型轉化影響[A];中國生物化學與分子生物學會第十二屆全國會員代表大會暨2018年全國學術會議摘要集[C];2018年

6 曾嬌;;巨噬細胞極化對炎癥性疾病的影響[A];第十三屆全國免疫學學術大會摘要匯編[C];2018年

7 李小鵬;張倫理;;巨噬細胞極化現(xiàn)象與結核病的關系[A];中華醫(yī)學會2014全國微生物學與免疫學學術年會論文匯編[C];2014年

8 陳羅泉;萬曉朋;韓泉;王青青;;白細胞介素27在巨噬細胞抗病毒天然免疫應答中的作用研究[A];浙江省免疫學會第十次學術大會論文集[C];2016年

9 馬曉媛;田李星;靳賀;梁華平;;創(chuàng)傷/燒傷后單核—巨噬細胞變化及調節(jié)措施研究進展[A];2015第十一屆全國中西醫(yī)結合災害醫(yī)學大會、江蘇省中西醫(yī)結合學會第二屆災害醫(yī)學學術會議、中華衛(wèi)生應急電子雜志第二屆編委會會議暨2015江蘇國際醫(yī)療器械科技博覽會學術論文集[C];2015年

10 馬翠卿;胡光磊;尹曉琳;胡潔;楊建嶺;王秀榮;魏林;;A族鏈球菌誘導巨噬細胞壞死而非凋亡[A];河北省免疫學會第六次免疫學大會資料匯編[C];2010年

相關重要報紙文章 前10條

1 主持人 王建新;巨噬細胞的多面人生[N];醫(yī)藥經濟報;2015年

2 通訊員 李靜 記者 胡德榮;惡性腫瘤巨噬細胞未必皆“惡人”[N];健康報;2014年

3 張化;新技術有望延長血小板保存期[N];中國醫(yī)藥報;2003年

4 張化;半乳糖可延長血小板保存期[N];中國醫(yī)藥報;2003年

5 蘭克;以嘗試用巨噬細胞治癱瘓[N];科技日報;2000年

6 記者 房琳琳;“別吃我”! 癌細胞還有第二種方式對巨噬細胞這樣說[N];科技日報;2017年

7 本報記者 張曄 通訊員 蔡心軼 張翰文;肥胖傷肝？原來是巨噬細胞在作怪[N];科技日報;2016年

8 唐穎 倪兵 陳代杰;巨噬細胞泡沫化抑制劑研究快步進行[N];中國醫(yī)藥報;2006年

9 侯嘉 何新鄉(xiāng);硒的神奇功能[N];中國食品質量報;2003年

10 記者 陶婷婷　通訊員 李靜;“助紂為虐”細胞竟會“棄惡從善”[N];上�？萍紙�;2014年

相關博士學位論文 前10條

1 于瀚卿;肝癌細胞對巨噬細胞的內質網應激信號傳遞及內質網應激巨噬細胞外泌體對肝癌細胞凋亡的影響和機制[D];安徽醫(yī)科大學;2018年

2 李華;結核分枝桿菌誘導的人巨噬細胞蛋白質組研究及快生菌構建探索[D];華中農業(yè)大學;2017年

3 范婷婷;TIPE2調控調節(jié)性T細胞胸腺外遷及M2巨噬細胞極化的分子機制研究[D];中國科學院大學(中國科學院深圳先進技術研究院);2018年

4 施翔翔;巨噬細胞CCL20和IL-17的調控機制及其與冠心病的關系研究[D];南方醫(yī)科大學;2018年

5 朱啟金;高糖刺激巨噬細胞源外泌體對腎小球系膜細胞的作用及機制研究[D];安徽醫(yī)科大學;2018年

6 成雪;酪蛋白糖肽抑制巨噬細胞炎癥反應的分子機制研究[D];中國農業(yè)大學;2015年

7 耿立霞;骨髓間充質干細胞對巨噬細胞極化的影響[D];山東大學;2017年

8 王治校;間充質干細胞移植對小鼠動脈硬化形成的影響及機制[D];武漢大學;2016年

9 魯錦志;黃芪多糖抑制游離脂肪酸誘導的巨噬細胞炎性反應及分子機制研究[D];武漢大學;2013年

10 高璐;巨噬細胞與頭頸部鱗狀細胞癌相互作用分子機制的研究[D];武漢大學;2017年

相關碩士學位論文 前10條

1 王義乾;骨髓誘導分化巨噬細胞的制備及組蛋白甲基化修飾對巨噬細胞釋放IL-6和TNF-α的影響[D];南方醫(yī)科大學;2015年

2 郭軼;維生素D對卵巢癌中腫瘤相關巨噬細胞效應與機制研究[D];蘇州大學;2018年

3 陳麗;電針調控肥胖小鼠脂肪M1/M2巨噬細胞化的機制研究[D];成都中醫(yī)藥大學;2018年

4 張曉雪;基于阿霉素與腫瘤相關巨噬細胞極化因子IL-21聯(lián)合遞送的碳納米角/脂質體核殼狀納米載體的研究[D];蘇州大學;2018年

5 高弘斐;外周血間充質干細胞對巨噬細胞和Th17/Treg細胞平衡的體外調節(jié)研究[D];遵義醫(yī)學院;2018年

6 劉英光;GPR120受體在巨噬細胞功能調節(jié)中的作用[D];遵義醫(yī)學院;2018年

7 李依蔓;位于內置網上的蛋白Herpud1調節(jié)IL-4誘導的巨噬細胞極化和遷移[D];重慶醫(yī)科大學;2018年

8 劉芊伊;貓爪草醇類提取物對小鼠骨髓來源巨噬細胞極化的影響[D];遵義醫(yī)學院;2018年

9 張林坤;Pyrin在巨噬細胞M1型極化中的作用研究[D];重慶醫(yī)科大學;2018年

10 胡露;PSRC1過表達對巨噬細胞脂質代謝和炎癥反應的影響及機制[D];南方醫(yī)科大學;2018年

本文編號：2761371