【摘要】：目的:本研究旨在探究白細(xì)胞介素-8(Interleukin-8,IL-8)及低剪切力對(duì)卵巢癌上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)過程的影響,并初步分析Wnt/β-catenin信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑在IL-8及低剪切應(yīng)力誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞發(fā)生EMT中的作用,為IL-8及低剪切應(yīng)力誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的分子機(jī)理的深入研究奠定基礎(chǔ),為卵巢癌提供更早期的診斷、預(yù)防、干預(yù)以及尋找與其相關(guān)分子靶向藥物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:1.采用免疫組化檢測(cè)和統(tǒng)計(jì)相關(guān)分析91例漿液性卵巢癌臨床樣本、人卵巢癌腫瘤細(xì)胞株SKOV3中IL-8及IL-8受體CXCR1、CXCR2的表達(dá)關(guān)系。2.外源性人重組IL-8(100 ng/m L)誘導(dǎo)處理SKOV3細(xì)胞48 h,Western blot檢測(cè)Wnt/β-catenin及EMT相關(guān)蛋白的變化情況,分析IL-8對(duì)Wnt/β-catenin信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的激活以及對(duì)EMT的影響。3.采用細(xì)胞免疫熒光、Transwell、實(shí)時(shí)無標(biāo)記細(xì)胞技術(shù)(RTCA)定性定量分析IL-8處理后,SKOV3細(xì)胞和人正常的卵巢上皮細(xì)胞株HOSEpiC的侵襲、遷移及細(xì)胞骨架的變化,Western blot檢測(cè)纖毛驅(qū)動(dòng)蛋白KIF3A的表達(dá)情況。4.利用體外流體力學(xué)加載模型(剪切應(yīng)力強(qiáng)度:1.5 dyne/cm2,作用2 h)處理SKOV3細(xì)胞,Western blot檢測(cè)Wnt/β-catenin及EMT相關(guān)蛋白的變化情況,初步分析低剪切應(yīng)力對(duì)Wnt/β-catenin信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的激活以及對(duì)EMT的影響。結(jié)果:1.91例漿液性卵巢癌臨床樣本中,共有82例表達(dá)IL-8(90.1%),89例表達(dá)CXCR1(97.8%),88例表達(dá)CXCR2(96.7%),SKOV3中IL-8、CXCR1、CXCR2均表達(dá)陽(yáng)性;卵巢癌組織中IL-8蛋白的表達(dá)與CXCR2蛋白的表達(dá)呈明顯正相關(guān)關(guān)系(r=0.253,P0.05),而與CXCR1無相關(guān)關(guān)系(r=0.178,P0.05)。2.IL-8(100 ng/m L)處理卵巢癌SKOV3細(xì)胞48 h后,顯著增加SKOV3細(xì)胞Wnt/β-catenin信號(hào)通路中關(guān)鍵蛋白(P-β-catenin、CD44、MET、c-Jun)表達(dá);同時(shí),下調(diào)上皮細(xì)胞標(biāo)志物E-cadherin而上調(diào)間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物Vimentin和snail的表達(dá),從而促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞發(fā)生EMT。3.IL-8(100 ng/mL)誘導(dǎo)SKOV3細(xì)胞細(xì)胞骨架的重排,纖毛形成標(biāo)志物KIF3A的表達(dá)上調(diào),促進(jìn)纖毛形成。4.Transwell和RTCA定量結(jié)果顯示,IL-8(100 ng/m L)作用后,明顯增強(qiáng)SKOV3細(xì)胞的侵襲能力(P0.05),而對(duì)HOSEpiC細(xì)胞遷移則并無影響(P0.05)。5.流體剪切應(yīng)力(1.5 dyne/cm~2、2 h)處理SKOV3細(xì)胞,可顯著上調(diào)P-β-catenin,激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路,下調(diào)E-cadherin、上調(diào)Vimentin,從而促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞發(fā)生EMT。結(jié)論:以上結(jié)果顯示:IL-8及低剪切應(yīng)力可以通過激活Wnt/β-catenin信號(hào)途徑,促使卵巢癌細(xì)胞獲得EMT特性,促進(jìn)細(xì)胞骨架的重排、細(xì)胞膜表面纖毛偽足的形成(KIF3A),從而增強(qiáng)其侵襲、遷移能力。提示:腫瘤微環(huán)境中的關(guān)鍵理化因素(IL-8和低剪應(yīng)力)對(duì)卵巢癌細(xì)胞的作用在卵巢癌生長(zhǎng)、局部侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著重要的作用,與其相關(guān)的Wnt/β-catenin信號(hào)通路關(guān)鍵性信號(hào)分子是卵巢癌細(xì)胞早期進(jìn)行惡性轉(zhuǎn)化的病理性基礎(chǔ),為進(jìn)一步深入的研究卵巢癌防治以及靶向藥物的篩選提供新的治療靶點(diǎn)。
【學(xué)位授予單位】：新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R737.31
【圖文】：

IL-8 CXCR1 CXCR2圖 1-1 卵巢癌組織 IL-8 及其受體 CXCR1 和 CXCR2 表達(dá)情況（免疫組化，標(biāo)尺=100 μm）Fig.1-1 Ovarian tissue IL - 8 and its receptor CXCR1/CXCR2 expression(immunohistochemical, scale=100 μm)3.2 統(tǒng)計(jì)分析 IL-8 與 CXCR1 和 CXCR2 之間的關(guān)系用 SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)評(píng)分?jǐn)?shù)據(jù)，Spearman 秩相關(guān)統(tǒng)計(jì)分析顯示， IL-8 的表達(dá)與CXCR2 呈明顯正相關(guān)關(guān)系(r=0.253，P<0.05)，而與 CXCR1 無相關(guān)關(guān)系（r=0.178，P>0.05），詳見表 1-2 和圖 1-2（CXCR1 與 IL-8 的散點(diǎn)圖未顯示）。提示，在卵巢癌癌組織中 IL-8 與其受體 CXCR2 結(jié)合發(fā)揮著更為重要的生物學(xué)作用。指標(biāo) IL-8相關(guān)性r 值 P 值CXCR1 0.178 0.092CXCR2 0.253 0.015

圖 1-2 IL-8 與 CXCR2 評(píng)分的散點(diǎn)圖Fig.1-2 IL-8 and CXCR2 score of scatter diagram癌細(xì)胞株 SKOV3 的免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果-3 顯示：標(biāo)尺為 100 μm，圖片中黃色區(qū)域是陽(yáng)性表達(dá)區(qū)域，卵巢癌細(xì)胞株 SKOV3 中 IL-8、CXCR1、CXCR2 均勻表達(dá)，XCR1 和 CXCR2）與卵巢癌細(xì)胞株關(guān)系密切。3 細(xì)胞 IL-8 及其受體 CXCR1 和 CXCR2 的表達(dá)情況（免疫組化，標(biāo) and its receptors CXCR1/CXCR2 expression in SKOV3 cells (immunoscale=100 μm)

圖 1-2 IL-8 與 CXCR2 評(píng)分的散點(diǎn)圖Fig.1-2 IL-8 and CXCR2 score of scatter diagram.3 卵巢癌細(xì)胞株 SKOV3 的免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果如圖 1-3 顯示：標(biāo)尺為 100 μm，圖片中黃色區(qū)域是陽(yáng)性表達(dá)區(qū)域，而藍(lán)色部細(xì)胞核。卵巢癌細(xì)胞株 SKOV3 中 IL-8、CXCR1、CXCR2 均勻表達(dá)，提示 IL-受體（CXCR1 和 CXCR2）與卵巢癌細(xì)胞株關(guān)系密切。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 Zitong Zhao;Xinyi Fan;Lanfang Jiang;Zhongqiu Xu;Liyan Xue;Qimin Zhan;Yongmei Song;;miR-503-3p promotes epithelialemesenchymal transition in breast cancer by directly targeting SMAD2 and E-cadherin[J];Journal of Genetics and Genomics;2017年02期

2 任周新;余海濱;李建生;沈俊嶺;李俊凱;羅珊;;三七總皂苷對(duì)人肺泡上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化的抑制作用[J];中國(guó)中藥雜志;2015年23期

本文編號(hào)：2754863