【摘要】：目的本研究在體外培養(yǎng)子宮內膜癌細胞Ishikawa的基礎上,明確高水平棕櫚酸(Palmic Acid,PA)是否通過DNMT1/3b抑制KLF4表達,從而促進子宮內膜癌細胞的增殖、侵襲和遷移能力,并探討其可能的分子機制,為臨床尋找治療肥胖相關子宮內膜癌發(fā)生、發(fā)展的分子靶標,提供理論依據(jù)。方法(1)體外培養(yǎng)子宮內膜癌細胞Ishikawa,分別用20μM及50μM PA作用于癌細胞。(2)轉染過表達質�；騭i RNA,分別上/下調KLF4、DNMT1和DNMT3b,q RT-PCR和Western Blot技術檢測DNMT1、DNMT3b、KLF4、P53、Ki67以及MMP2的m RNA和蛋白表達水平。(3)運用CCK-8、Transwell及劃痕實驗,檢測對Ishikawa細胞增殖、侵襲和遷移能力的影響。(4)應用SPSS 17.0軟件對數(shù)據(jù)分析。數(shù)據(jù)分析采用數(shù)據(jù)正態(tài)分布使用t檢驗和數(shù)據(jù)非正態(tài)分布使用秩和檢驗,多組間相互比較通常采用單因素方差分析。P0.05認為有統(tǒng)計學意義。結果1.PA可影響KLF4及相關基因的表達,并導致子宮內膜癌細胞的生物學行為發(fā)生變化(1)20μM、50μM PA分別作用于Ishikawa細胞24小時后,20μM組結果顯示,與對照組相比,KLF4 m RNA表達水平顯著降低(P0.05),Ki67、MMP2 m RNA表達水平顯著升高(P0.05)。50μM組結果顯示,與對照組相比,KLF4和P53的m RNA及蛋白表達水平均顯著降低(P0.05),Ki67及MMP2的m RNA及蛋白表達水平均顯著升高(P0.05)。(2)20μM、50μM PA分別作用于Ishikawa細胞24和48小時后,與對照組相比,細胞的侵襲和遷移能力均顯著升高(P0.05),但對細胞的增殖能力無顯著影響(P0.05)。2.KLF4可影響下游相關基因的表達,并導致子宮內膜癌細胞的生物學行為發(fā)生變化(1)上調KLF4 24 h后,Ki67、MMP2 m RNA及蛋白表達水平均顯著低于對照組(P0.05),上調KLF4 24和48 h后,Ishikawa細胞的增殖、侵襲和遷移能力均顯著低于對照組(P0.05)。(2)下調KLF4 24 h后,與對照組相比,P53 m RNA及蛋白表達水平均顯著降低(P0.05),Ki67、MMP2 m RNA及蛋白表達水平均顯著升高(P0.05);下調KLF4 24和48 h后,與對照組相比,Ishikawa細胞的侵襲和遷移能力均顯著升高(P0.05)。3.PA通過抑制子宮內膜癌細胞KLF4及下游基因的表達,導致細胞生物學行為的變化(1)50μM PA作用于子宮內膜癌細胞Ishikawa的同時,上調KLF4 24 h后,與對照組相比,P53 m RNA表達水平顯著升高(P0.05),Ki67、MMP2 m RNA及蛋白表達水平均顯著降低(P0.05)。(2)50μM PA作用于子宮內膜癌細胞Ishikawa的同時,上調KLF4 24和48 h后,與對照組相比,Ishikawa細胞的增殖、侵襲和遷移能力均顯著降低(P0.05)。4.PA通過上調甲基轉移酶(DNMT1/3b)抑制KLF4表達(1)子宮內膜癌患者癌組織中DNMT1、DNMT3b的m RNA及蛋白表達水平均顯著高于非癌個體子宮內膜組織(P0.05)。(2)20μM、50μM PA作用于Ishikawa細胞24小時后,與對照組相比,DNMT1、DNMT3b m RNA及蛋白表達水平均顯著升高(P0.05)。(3)下調子宮內膜癌細胞Ishikawa DNMT1/3b表達24 h后,與對照組相比,KLF4 m RNA及蛋白表達水平均顯著升高(P0.05)。(4)50μM PA作用于子宮內膜癌細胞Ishikawa的同時,下調DNMT1/3b 24 h后,與對照組相比,KLF4 m RNA及蛋白表達水平均顯著升高(P0.05)。結論1.PA可能通過抑制KLF4的表達,導致下游相關癌基因、抑癌基因的表達紊亂,最終促進了子宮內膜癌細胞Ishikawa的增殖、侵襲和遷移能力。2.PA可能通過促進DNA甲基轉移酶DNMT1/3b的表達,抑制子宮內膜癌細胞Ishikawa KLF4的表達。
【學位授予單位】：石河子大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R737.33
【圖文】：

不同濃度PA作用于Ishikawa細胞24h、48h、72h、96h后，CCK-8檢測活細胞數(shù)目

不同濃度PA刺激Ishikawa細胞24h后，KLF4、P53、Ki67、MMP2表達水平

【參考文獻】

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本文編號：2724576