【摘要】：卵巢癌是女性常見的生殖系統(tǒng)腫瘤,其中上皮源性卵巢癌占絕大多數(shù),其臨床早期診斷較困難,缺乏有效治療手段,預后往往不佳。卵巢癌的病因和發(fā)病機制迄今仍未完全闡明,由于缺乏有效的預后診斷指標,卵巢癌的診治效率被大大限制。所以,尋找具有預后指導意義的分子靶標,成為當今卵巢癌研究的熱點之一�，F(xiàn)代分子病理學技術的發(fā)展,為卵巢癌的臨床病理研究提供了新的思路。胸腺基質淋巴細胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)是一種IL-7樣細胞因子,從小鼠胸腺基質細胞系培養(yǎng)上清液中被分離鑒定,最初被認為是一種淋巴細胞生長因子。新近研究提示,TSLP能將機體與外界環(huán)境交界的屏障(皮膚、氣道、腸道、眼組織等)免疫與Th2細胞免疫應答反應聯(lián)系在一起。最新報道指出,TSLP在包括乳腺癌、宮頸癌、胰腺癌、胃癌、霍奇金病等惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中也發(fā)揮了關鍵的作用。卵巢癌的腫瘤免疫狀態(tài)由Th2細胞反應占主導,考慮到TSLP在Th2型免疫反應中發(fā)揮的重要作用,我們推測TSLP可能參與卵巢癌的發(fā)生發(fā)展,并且可能是卵巢癌的生物標記物,甚至是臨床預后判斷的關鍵靶點。本研究旨在分析TSLP作為一種潛在的分子標記物在卵巢癌診斷和預后判斷的價值,為卵巢癌的臨床評估提供一種新的思路,并為進一步探索TSLP在卵巢癌發(fā)生發(fā)展過程中扮演何種角色,以及是否可以成為卵巢癌潛在治療靶點做前期的鋪墊。研究目的:通過評價TSLP在上皮性卵巢癌細胞系和臨床患者卵巢癌組織中的表達,統(tǒng)計分析TSLP的表達與卵巢癌患者的臨床病理學參數(shù),確定TSLP與卵巢癌患者的預后關聯(lián),判斷TSLP在上皮性卵巢癌的診斷和預后方面的價值,也為進一步的臨床轉化和相應機制研究打下基礎。研究方法1.培養(yǎng)人上皮源性卵巢癌(EOC)細胞系SKOV3和HO8910以及永生化卵巢上皮細胞系IOSE386,提取上述細胞系的RNA并逆轉錄為c DNA,實時定量PCR檢測并比較細胞TSLP的基因表達水平。酶聯(lián)免疫吸附測定細胞系培養(yǎng)上清TSLP濃度。2.收集27例卵巢癌手術患者的新鮮癌組織及鄰近癌旁樣本,提取RNA逆轉錄為c DNA,實時定量PCR檢測并比較卵巢癌組織和鄰近正常組織的TSLP的基因表達水平。3.收集144例原發(fā)性上皮性卵巢癌(包括多種組織學類型)、25例卵巢良性腫瘤、38例卵巢交界性腫瘤,以及25例具有正常卵巢和29例輸卵管石蠟標本,隨訪并詳細記錄多項臨床病理學參數(shù)。制作上述標本的組織芯片,行免疫組化,檢測TSLP的蛋白表達水平,統(tǒng)計學分析TSLP的表達與患者的臨床病理學參數(shù)的相關性,生存曲線分析TSLP表達與患者預后情況之間的關系。研究結果:1.TSLP m RNA和蛋白水平在兩種人上皮性卵巢癌細胞系SKOV3和HO8910中較卵巢上皮細胞系IOSE386表達顯著增高(P0.01),兩種人上皮性卵巢癌細胞系間TSLP的m RNA和蛋白水平也有顯著性差異。2.與鄰近正常組織相比,卵巢癌組織中TSLP基因水平顯著增加(P0.001)。3.與正常卵巢/輸卵管及卵巢良性病變相比,EOC中TSLP的表達顯著升高,有明顯統(tǒng)計學差異(P0.01)。4.EOC中TSLP高表達與初診年齡(P=0.009)、組織學類型(P=0.022)、FIGO分期(P0.001)、組織分化程度(P=0.015)、盆腔腫瘤轉移(P0.001)及淋巴道轉移(P=0.034)顯著相關。5.完成隨訪,繪制EOC患者總生存期與無病生存期的Kaplan-Meier生存曲線,與TSLP低表達組相比,TSLP高表達組的患者總生存期及無病生存期均顯著縮短,P0.001。單因素分析結果提示,TSLP高表達、初診年齡、FIGO分期、組織分化程度、盆腔轉移、淋巴道轉移均與EOC患者的預后顯著相關(P0.05);多因素Cox比例風險模型分析結果提示,在上述預后相關單風險因素中,僅TSLP高表達與盆腔轉移為EOC患者預后的獨立預測風險因素。研究結論:1.TSLP在EOC細胞及臨床手術標本中表達顯著。2.TSLP高表達與EOC相關的臨床病理學參數(shù)顯著相關。3.TSLP高表達是EOC預后判斷的獨立風險因素。4.綜上所述,TSLP可能成為EOC潛在的診斷及預后生物標記物,并可能作為EOC的免疫治療靶點。
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R737.31
【圖文】：

圖 1：卵巢癌樣本和上皮性卵巢癌細胞系中 TSLP mRNA 水平：（檢測卵巢癌患者病理組織標本卵巢癌組織與鄰近正常組織 TSLP平。（B）實時 RT-PCR 檢測永生化卵巢上皮細胞系 IOSE386 和巢癌細胞系 SKOV3 和 HO8910 TSLP mRNA 表達水平。（C）酶檢測永生化卵巢上皮細胞系 IOSE386 和兩種人上皮性卵巢癌細HO8910 細胞培養(yǎng)上清中 TSLP 的分泌水平。(*P<0.05，**P<0.2.TSLP 在組織芯片中的表達情況2.1 組織芯片整體評估本研究一共制作了六塊組織芯片，平均每塊組織芯片有 40-初步觀察每個組織芯片確定所取組織位置是否具有一定的代表性卵巢/輸卵管組織和卵巢癌組織特性，結果顯示組織代表性良好織芯片行免疫組化染色，于鏡下觀察，低倍鏡可見組織為類圓形

圖 2.組織芯片外觀示例，掉片明顯的組織未計入統(tǒng)計。2.2 TSLP 在不同細胞組織的表達情況2.2.1 TSLP 在上皮性卵巢癌腫瘤細胞胞漿中的表達本研究收集上皮性卵巢癌標本的組織學類型包括：漿液性、粘液性、子膜性、透明細胞性、移形上皮性、混合性和未分化型等類型，其中絕大部分液性卵巢癌。對這些類型的細胞進行仔細的鏡下觀察，多數(shù)癌細胞有TSLP表主要定位于胞漿。如圖 3 所示, 腫瘤細胞層次增多，異型性明顯，有較多乳突起且乳頭分支多而復雜，成樹枝狀分布，呈現(xiàn)卵巢漿液性囊腺癌的特點。疫組化染色，鏡下可見，TSLP 的表達多呈黃褐色沉淀彌散或團塊狀，分布瘤細胞胞漿中，胞核紫蘭色染色，通常核大深染。TSLP 陽性的細胞均為腫胞，間質的幾乎沒有著色，說明非特異性染色得到較好控制。結果提示，可能由腫瘤細胞直接合成的，并通過分泌發(fā)揮作用。

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