【摘要】：【目的】Statmin1(STMN1)為微管解聚蛋白,通過改變微管的穩(wěn)定性使得微管骨架蛋白發(fā)生重排,從而參與調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、遷移、凋亡等過程。既往研究已經(jīng)證實在多種惡性腫瘤細(xì)胞中都可以檢測到STMN1高表達(dá),STMN1在宮頸癌和子宮頸上皮內(nèi)瘤變3級組織中也呈高表達(dá),與臨床預(yù)后密切相關(guān),然而STMN1與宮頸癌生物學(xué)行為及其機(jī)制尚缺乏深入研究。本研究第一部分旨在深入探究STMN1對宮頸癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其可能的分子機(jī)制�！痉椒ā�1、Oncomine數(shù)據(jù)庫檢索并分析STMN1基因m RNA水平在宮頸鱗狀細(xì)胞癌以及正常宮頸鱗狀上皮中的表達(dá)差異。收集術(shù)后病理診斷符合宮頸鱗狀細(xì)胞癌患者的癌組織和相應(yīng)癌旁正常組織,提取總RNA,進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng),實時定量PCR檢測STMN1m RNA表達(dá)水平,免疫組織化學(xué)染色方法檢測兩組間STMN1蛋白表達(dá)水平差異。2、采用小分子RNA干擾技術(shù)沉默宮頸癌細(xì)胞系Siha和C33A中STMN1基因的表達(dá),劃痕實驗、Transwell小室技術(shù)檢測實驗組(si-STMN1)與正常對照組(si-NC)干預(yù)C33A和Siha細(xì)胞侵襲和遷移能力的影響。3、Real-time PCR與Western blotting技術(shù)分別檢測比較各組細(xì)胞中相關(guān)基因m RNA水平和蛋白水平表達(dá)情況�！窘Y(jié)果】1、Oncomine數(shù)據(jù)顯示:在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中,STMN1的表達(dá)水平明顯高于宮頸鱗狀上皮組織中的表達(dá)。與配對癌旁組織中的STMN1表達(dá)水平相比,宮頸癌患者原發(fā)灶組織標(biāo)本中STMN1 m RNA和蛋白表達(dá)水平均明顯升高。2、體外實驗證實,實驗組(si-STMN1)與正常對照組(si-NC)相比下調(diào)STMN1表達(dá)顯著降低宮頸癌細(xì)胞的遷移能力及侵襲能力。3、在宮頸癌細(xì)胞Siha和C33A中下調(diào)STMN1表達(dá)后,MMP2和MMP9的m RNA和蛋白表達(dá)水平均顯著降低�！窘Y(jié)論】本研究結(jié)果初步提示,STMN1在宮頸癌中高表達(dá),其與宮頸癌細(xì)胞侵襲和遷移能力密切相關(guān),可能的機(jī)制為:STMN1的高表達(dá)水平導(dǎo)致基質(zhì)金屬蛋白酶活性升高,為腫瘤細(xì)胞侵襲和遷移提供有利條件。靶向STMN1及其相關(guān)下游信號通路可能有助于宮頸癌治療�！灸康摹壳捌谘芯恳呀�(jīng)證實在STMN1在宮頸癌細(xì)胞的生物學(xué)惡性行為中發(fā)揮了重要的作用,尤其是對宮頸癌細(xì)胞C33A和Siha的侵襲和遷移能力的影響。目前研究表明,STMN1高表達(dá)與惡性腫瘤患者不良預(yù)后密切相關(guān),還可作為評估多種類型腫瘤的標(biāo)志物,然而STMN1與宮頸癌耐藥的關(guān)系和機(jī)制尚缺乏深入研究。本研究第二部分旨在深入探究在宮頸癌中的異常表達(dá)的STMN1對宮頸癌細(xì)胞鉑類化療藥物敏感性的影響及其可能的分子機(jī)制�！痉椒ā�1、采用小分子RNA干擾技術(shù)沉默宮頸癌細(xì)胞系Siha和C33A中STMN1基因的表達(dá),Cell counting kit(CCK8)實驗檢測宮頸癌細(xì)胞Siha和C33A經(jīng)過STMN1 si RNA處理后對化療藥物敏感性的影響。2、流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)檢測鉑類化療藥物干預(yù)宮頸癌細(xì)胞系的同時沉默STMN1的表達(dá)對宮頸癌細(xì)胞凋亡的影響。3、Real-time PCR與Western blotting技術(shù)分別檢測比較各組細(xì)胞中相關(guān)基因m RNA水平和蛋白水平表達(dá)情況�！窘Y(jié)果】1、CCK8實驗證實,與對照組相比下調(diào)STMN1表達(dá)可增加宮頸癌細(xì)胞Siha和C33A對化療藥物(順鉑)敏感性。隨著化療藥物(順鉑)濃度逐漸增加,STMN1的表達(dá)水平也隨之增加。2、流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)結(jié)果表明沉默宮頸癌細(xì)胞Siha和C33A中STMN1表達(dá)后宮頸癌細(xì)胞系對化療藥物的細(xì)胞凋亡率增加3、Western blotting實驗結(jié)果顯示,順鉑處理宮頸癌細(xì)胞系后沉默STMN1表達(dá)能夠明顯改變細(xì)胞凋亡,表現(xiàn)為凋亡相關(guān)蛋白BAX表達(dá)水平上調(diào),BCL-2表達(dá)水平下調(diào),Cleaved-Casepase3的表達(dá)水平上調(diào)�！窘Y(jié)論】沉默宮頸癌細(xì)胞STMN1的表達(dá)能增加化療藥物(順鉑)敏感性。其可能的機(jī)制為:抑制STMN1表達(dá)導(dǎo)致宮頸癌細(xì)胞的凋亡增多,從而改善對化療藥物順鉑的敏感性。本研究結(jié)果初步提供了STMN1與宮頸癌細(xì)胞耐藥關(guān)系的證據(jù)以及可能的潛在機(jī)制,靶向STMN1基因為改善宮頸癌化療藥物敏感性提供新的理論科學(xué)依據(jù)和治療策略。
【圖文】：

圖 1.1 Oncomine 數(shù)據(jù)庫中 STMN1 在宮頸癌組織和宮頸鱗狀上皮組織的表達(dá)情況。A圖表示：Zhai Cervix Statistics 數(shù)據(jù)庫中 9 例正常宮頸組織和 21 例宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織標(biāo)本表達(dá)差異統(tǒng)計。B 圖表示：Scotto Cervix Statistics 數(shù)據(jù)庫中 24 例正常宮頸組織和 32 例宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織標(biāo)本的 STMN1 mRNA 表達(dá)差異統(tǒng)計。其中縱坐標(biāo)選用校正后 log2中位數(shù)值，統(tǒng)計分析選用 t 檢驗。（***表示 P<0.001）

宮頸癌細(xì)胞系 Transwell 遷移和侵襲實驗中轉(zhuǎn)染 siNC 和 siSTMN1 后細(xì)胞典型圖片及其對應(yīng)統(tǒng)計分析圖。（每組實驗至少重復(fù)三次。*表示 P<0.05，**表示 P<0.01）1.5.3 STMN1 在宮頸癌細(xì)胞中調(diào)節(jié) MMP-2 和 MMP-9 的表達(dá)有文獻(xiàn)報道，基質(zhì)金屬蛋白酶在多種類型腫瘤的惡性進(jìn)展均發(fā)揮著重要作用，通過降解基底膜Ⅳ型膠原和變性的間質(zhì)膠原促進(jìn)腫瘤的侵襲和遷移能力[18-20]。為了進(jìn)一步探究 STMN1 對宮頸癌細(xì)胞侵襲和遷移能力的影響機(jī)制，我們利用 real-time PCR 技術(shù)和 Western Blotting 技術(shù)分別檢測 STMN1 siRNA 或 siNC 處理宮頸癌細(xì)胞 Siha 和C33A 后 MMP-2、MMP-9 的 mRNA 和蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果顯示，下調(diào)宮頸癌細(xì)胞中 STMN1 的表達(dá)水平后，，MMP-2、MMP-9 的 mRNA 和蛋白的表達(dá)水平均明顯降低，并且具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（兩者 t 檢驗 P <0.005）。提示在宮頸癌細(xì)胞侵襲或遷移發(fā)生過程中 STMN1 可能是通過促進(jìn)基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)，降解基底膜Ⅳ型膠原和變性的間質(zhì)膠原，從而促進(jìn)腫瘤的侵襲和遷移能力。（圖 1.4）
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R737.33

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本文編號：2707278