【摘要】：目的探討miR-152在子宮內(nèi)膜癌孕激素抵抗中的作用機(jī)制,尋找子宮內(nèi)膜癌早期診斷和與靶向治療有關(guān)的新標(biāo)志物。方法1.利用免疫組織化學(xué)染色分析子宮內(nèi)膜癌組織、子宮內(nèi)膜增生不伴不典型增生組織和正常子宮內(nèi)膜組織中的DNMT1及PR的表達(dá)情況。2.利用Real-time PCR分別檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌組織(孕激素受體高表達(dá)組織和孕激素受體低表達(dá)組織)、子宮內(nèi)膜增生不伴不典型增生組織和正常子宮內(nèi)膜組織中的miR-152及其靶標(biāo)DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1DNMT1的表達(dá)水平。3.選取孕激素受體PR表達(dá)水平不同的兩種人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株Ishikawa(PR+,孕激素受體為高表達(dá))和KLE(PR-,孕激素受體為低表達(dá)),利用Real-time PCR檢測(cè)miR-152、DNMT1以及PRB在人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株中的表達(dá)水平。4.采用脂質(zhì)體法將miR-152 mimic和inhibitor及其對(duì)照mimic NC和inhibitor NC瞬時(shí)轉(zhuǎn)染子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株Ishikawa和KLE。轉(zhuǎn)染72h后,提取RNA,逆轉(zhuǎn)錄后Real-time PCR檢測(cè)miR-152、DNMT1以及PRB的表達(dá)水平。5.將miR-152 mimic及其對(duì)照mimic NC瞬時(shí)轉(zhuǎn)染子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株KLE,在轉(zhuǎn)染后0,48和72h進(jìn)行CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。結(jié)果1.免疫組化染色結(jié)果顯示:DNMT1在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)顯著高于正常子宮內(nèi)膜組織和子宮內(nèi)膜增生不伴不典型增生組織,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.0001)。而DNMT1在正常子宮內(nèi)膜組織和子宮內(nèi)膜增生不伴不典型增生組織中的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.218)。PR在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)明顯低于正常子宮內(nèi)膜組織和子宮內(nèi)膜增生不伴不典型增生組織,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.0001)。而PR在正常子宮內(nèi)膜組織和子宮內(nèi)膜增生不伴不典型增生組織中的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.202)。DNMT1在PR陰性子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)明顯高于PR陽(yáng)性子宮內(nèi)膜癌組織,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.002)。2.Real-time PCR結(jié)果顯示:與正常子宮內(nèi)膜組織相比,miR-152在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)水平明顯降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.0001)。與PRB(+)子宮內(nèi)膜癌組織相比,miR-152在PRB(-)子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)水平更低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.0479)。與正常子宮內(nèi)膜組織相比,DNMT1在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)水平明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.0001)。與PRB(+)子宮內(nèi)膜癌組織相比,DNMT1在PRB(-)子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)水平更高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.0389)。3.Real-time PCR結(jié)果顯示:與子宮內(nèi)膜癌孕激素受體高表達(dá)PRB(+)Ishikawa細(xì)胞相比,miR-152在子宮內(nèi)膜癌孕激素受體低表達(dá)PRB(-)KLE細(xì)胞中的表達(dá)水平顯著降低,DNMT1的表達(dá)水平顯著升高,而PRB的表達(dá)水平顯著降低,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.0001)。4.Real-time PCR結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染miR-152 mimic后,Ishikawa和KLE細(xì)胞株中miR-152的平均表達(dá)量均顯著升高;而轉(zhuǎn)染miR-152 inhibitor后,miR-152的平均表達(dá)量均顯著降低。差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.0001)。5.Real-time PCR結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染miR-152 mimic后,Ishikawa和KLE細(xì)胞株中DNMT1的平均表達(dá)量均降低,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Ishikawa:P=0.0004;KLE:P=0.0001);但與子宮內(nèi)膜癌PR(+)Ishikawa細(xì)胞相比,DNMT1在子宮內(nèi)膜癌PR(-)KLE細(xì)胞中的表達(dá)水平降低幅度較小,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.0026)。而轉(zhuǎn)染miR-152 inhibitor后,DNMT1的平均表達(dá)量均升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Ishikawa:P=0.0002;KLE:P0.0001);但與子宮內(nèi)膜癌PR(+)Ishikawa細(xì)胞相比,DNMT1在子宮內(nèi)膜癌PR(-)KLE細(xì)胞中的表達(dá)水平升高幅度較大,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.0192)。6.Real-time PCR結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染miR-152 mimic后,Ishikawa和KLE細(xì)胞株中PRB的平均表達(dá)量均升高,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.0001);但與子宮內(nèi)膜癌PR(+)Ishikawa細(xì)胞相比,PRB在子宮內(nèi)膜癌PR(-)KLE細(xì)胞中的表達(dá)水平升高幅度較小,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.0002)。而轉(zhuǎn)染miR-152 inhibitor后,PRB的平均表達(dá)量均降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.0001);但與子宮內(nèi)膜癌PR(+)Ishikawa細(xì)胞相比,PRB在子宮內(nèi)膜癌PR(-)KLE細(xì)胞中的表達(dá)水平降低幅度較大,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.0047)。7.CCK-8法檢測(cè)結(jié)果顯示:KLE細(xì)胞在轉(zhuǎn)染miR-152 mimic 48h后,細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢,細(xì)胞增殖抑制(P=0.0024);在轉(zhuǎn)染miR-152 mimic 72h后,細(xì)胞增殖抑制則更為明顯(P=0.001)。差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論5.1 miR-152在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)下調(diào),在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起到了抑癌基因的作用。5.2 miR-152的下調(diào)及其靶標(biāo)DNMT1的上調(diào)在子宮內(nèi)膜癌PRB的下調(diào)或缺失中起到促進(jìn)作用,可能存在miR-152-DNMT1-PRB調(diào)節(jié)通路,在子宮內(nèi)膜癌孕激素抵抗的過(guò)程中發(fā)揮作用。5.3 miR-152可能作為子宮內(nèi)膜癌孕激素抵抗靶向治療的新生物學(xué)指標(biāo)。
【圖文】：

pre-miR-148/152家族的莖環(huán)結(jié)構(gòu)

miR-148/152家族成員的成熟miRNA序列
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R737.33

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3 游文獻(xiàn);肝癌患者血清循環(huán)MicroRNA-152和MicroRNA-602的檢測(cè)及臨床意義初探[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

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本文編號(hào)：2661557