發(fā)布時間：2020-05-07 09:49

【摘要】：目的:miRNA與宮頸癌的發(fā)病密切相關(guān),深入了解相關(guān)miRNA的功能,有利于揭示宮頸癌發(fā)病的分子機(jī)制,本研究旨在探討miR-99a對宮頸癌HeLa細(xì)胞增殖的影響及相關(guān)機(jī)制,為深入闡明宮頸癌發(fā)病機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:1、將miR-99a mimics瞬時轉(zhuǎn)染宮頸癌HeLa細(xì)胞,采用細(xì)胞生長曲線和平皿克隆形成實(shí)驗(yàn),觀察miR-99a對HeLa細(xì)胞增殖的影響。2、應(yīng)用Targetscan 6.2軟件預(yù)測miR-99a與HOXA1基因3’UTR的靶向性作用,通過熒光素酶報告基因檢測,分析miR-99a對HOXA1基因表達(dá)的影響。3、利用q RT-PCR和Western-blot檢測miR-99a對HOXA1表達(dá)的影響。4、構(gòu)建HOXA1干擾載體,轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞,篩選后利用細(xì)胞生長曲線和平皿克隆實(shí)驗(yàn)觀察HOXA1表達(dá)降低后對HeLa細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果:1、miR-99a被導(dǎo)入宮頸癌Hela細(xì)胞后,細(xì)胞的生長速度減慢,miR-99a mimics組Hela細(xì)胞克隆數(shù)為156±30,與miR-ctr組(386±49)比較,克隆數(shù)減少(F=26.093,P=0.001)。2、采用Targe tscan6.2(http://www.targetscan.org/)軟件分析miR-99a與HOXA1基因的作用位點(diǎn)發(fā)現(xiàn),miR-99a與HOXA1基因3’UTR的1485-1497位核苷酸位點(diǎn)存在結(jié)合,miR-99a表達(dá)后,抑制Hela細(xì)胞中HOXA1的表達(dá)。3、干擾HOXA1表達(dá)后,Hela細(xì)胞生長速度減慢,平皿克隆形成能力降低,si-HOXA1克隆數(shù)為165±35,si-control克隆數(shù)為390±46,P0.05。結(jié)論miR-99a與HOXA1基因3’UTR 1485-1497位核苷酸位點(diǎn)結(jié)合沉默其表達(dá),抑制宮頸癌HeLa細(xì)胞的增殖。
【圖文】：

第4章 結(jié) 果 檢測 miR-99a 在 HeLa 細(xì)胞中的表達(dá)R-99a 對宮頸癌細(xì)胞增殖的影響，采用脂質(zhì)體瞬時s 和對照序列導(dǎo)入 Hela 細(xì)胞，，通過 qRT-PCR 檢測情況。結(jié)果顯示：miR-99a mimics 導(dǎo)入 Hela 細(xì)光表達(dá)量明顯高于對照組（圖 4-1，t=64.5，P=0.002胞中呈現(xiàn)高表達(dá)，可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

圖 4.2 miR-99a 高表達(dá)對 HeLa 細(xì)胞增殖的影響生長曲線觀察 miR-99a 高表達(dá)對 HeLa 細(xì)胞生長的影響miR-ctr 組及未轉(zhuǎn)染組比較，P<0.05。克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察 miR-99a 高表達(dá)對 HeLa 細(xì)胞增殖的-99a 影響 Hela 細(xì)胞克隆形成的統(tǒng)計分析。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R737.33

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本文編號：2652797