【摘要】：目的:研究Kelch樣環(huán)氧氯丙烷相關蛋白1(Keap1)-核轉錄因子E2相關因子(Nrf2)信號通路對子宮內膜癌細胞生長、轉移及耐藥的影響。方法:選擇代表I型子宮內膜癌細胞的KLE細胞株和代表II型子宮內膜癌的ARK2細胞株,采用real-time PCR和Western blot法測定兩細胞株Keap1和Nrf2基因m RNA、蛋白表達,MTT法檢測兩細胞株對順鉑耐藥性。對Keap1表達更低、耐藥性更強的ARK2細胞株的Keap1基因過表達。Real-time PCR、Western blot、平板克隆實驗、MTT法、Transwell遷徙、侵襲實驗等方法研究ARK2細胞中Keap1過表達對Nrf2及下游靶基因表達、細胞生長、侵襲、耐藥的影響。結果:在ARK2和KLE細胞中Nrf2基因m RNA表達無明顯差異,ARK2細胞中Keap1基因表達無論是m RNA還是蛋白水平在的表達均要低于KLE細胞株,而Nrf2蛋白水平的表達在ARK2細胞株中則要明顯高于KLE細胞株。Keap1表達較低的ARK2細胞較Keap1高表達的KLE細胞耐藥性更高。ARK2細胞株中Keap1過表達能夠明顯下調Nrf2蛋白及下游基因ABCC2、γ-GCS表達;MTT實驗和平板克隆實驗表明Keap1過表達能夠降低ARK2細胞增殖能力;Keap1過表達能夠降低ARK2細胞遷徙和侵襲能力;Keap1過表達能夠顯著提高ARK2細胞對順鉑的敏感性。結論:Keap-Nrf2信號通路在子宮內膜漿液性癌細胞株ARK2中活化程度顯著高于子宮內膜樣癌細胞株KLE,Keap1對Nrf2蛋白表達調控是基于轉錄后的,且低表達的Keap1及高表達的Nrf2蛋白和腫瘤細胞的高耐藥性有關。在子宮內膜漿液性癌細胞株ARK2中上調Keap1基因表達能夠有效的下調Nrf2蛋白及其下游基因的表達,并降低腫瘤細胞的生長、遷徙、侵襲能力,且能提高腫瘤細胞對順鉑的敏感性。
【圖文】：

現(xiàn)代生物醫(yī)學進展www.biomed.cnjournals.comProgressinModernBiomedicineVol.19NO.1JAN.2019圖6MTT法比較ARK2和ARK2-K細胞在不同濃度順鉑作用48小時后的細胞存活率比較Fig.6ARK2andARK2-Kcellsweretreatedwiththeindicateddosesofcisplatinlfor48h.CellviabilitywasdeterminedbyMTTassay.注：*表示P<0.05.Note:*meansP<0.05.圖5Transwell法比較ARK2和ARK2-K細胞遷徙和侵襲能力注：ARK2細胞（A）和ARK2-K細胞（B）遷徙能力比較；ARK2細胞（C）和ARK2-K細胞（D）侵襲能力比較。Fig.5ThemigrationandinvasionofARK2andARK2-KcellswerecomparedbyTranswellmethodNote:ThemigrationabilityofARK2cells(A)andARK2-Kcells;(B)werecompared;andtheinvasionabilitiesofARK2cells;(C)andARK2-Kcells;(D)werecompared.但Nrf2mRNA表達在ARK2和KLE細胞中無明顯差別，而Keap1表達無論是mRNA還是蛋白表達在ARK2細胞中的表達均要低于KLE細胞株，說明在子宮內膜癌細胞中，Keap1對Nrf2的調控是基于轉錄后的。之前的研究表明Nrf2和腫瘤的增殖、遷徙、侵襲密切相關。腫瘤細胞的上皮間質化和增殖及侵襲密切相關，出現(xiàn)上皮間質化的腫瘤細胞中N-cadherin的過表達能夠增加Nrf2的活性[24]。在食管癌細胞中抑制Nrf2的表達后MMP2等侵襲相關基因的表達明顯降低，并且能夠上調E-cadherin的表達，使得腫瘤細胞的生長、侵襲能力明顯降低[25]。在本研究中我們在在子宮內膜漿液性癌來源的細胞株ARK2中上調Keap1表達，能夠顯著的降低ARK2細胞中Nrf2蛋白及其下游耐藥相關基因ABCC2、γ-GCS的

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