本文關(guān)鍵詞：子宮內(nèi)膜癌抑癌基因甲基化及UHRF1復合體表觀遺傳調(diào)控的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究目的：為子宮內(nèi)膜癌(Endometrial carcinoma, EC)的診斷尋找新的甲基化標志物,并進一步探索EC關(guān)鍵抑癌基因的表觀遺傳調(diào)控機制。研究方法：(1)運用甲基化特異性PCR (methylation specific PCR, MSP)法檢測155例子宮內(nèi)膜標本(正常內(nèi)膜27例,單純性增生22例,復雜性增生29例,不典型增生18例和子宮內(nèi)膜樣腺癌59例)6個抑癌基因(tumor suppressor genes, TSGs) (CDH13, SHP1, HIN1,DKK3, CTNNA1 和 PCDH8)啟動子區(qū)的甲基化狀態(tài)。(2)單獨或聯(lián)合應(yīng)用5-氮雜-2’-脫氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine, 5-Aza-CdR)口曲古抑菌素A (trichostatin A, TSA)處理子宮內(nèi)膜樣腺癌Ishikawa和Kle細胞株,實驗分為四組(未處理組,5-Aza-CdR組,TSA組和5-Aza-CdR+TSA組)。運用MSP和實時定量PCR(reverse transcription real-time quantitative PCR, qRT-PCR)等實驗方法分別檢測2個細胞株各組中CDH13和SHP1基因的甲基化狀態(tài)以及RNA表達水平的變化。(3)運用免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, Co-IP)技術(shù)檢測兩個細胞株的各組中UHRF1蛋白是否能夠共沉淀PRMT5蛋白以及兩者之間的關(guān)系。結(jié)果：(1)在EC中,CDH13和SHP1啟動子區(qū)存在著較高的甲基化率(分別為81.36%和86.44%),而其他四個抑癌基因(HIN1, DKK3, CTNNA1 和 PCDH8)的甲基化率則較低(分別為8.47%,15.25%,20.34%和16.95%)。CDH13不僅在EC中的甲基化率較高,在復雜增生和不典型增生中同樣出現(xiàn)了較高的甲基化率(分別為51.72%和50.00%),且其甲基化率與患者年齡、腫瘤分化程度以及腫瘤浸潤深度存在相關(guān)性(p0.05)。SHP1僅在EC中存在較高的甲基化率,且與患者年齡和腫瘤分化程度相關(guān)(p0.05)。(2)在Ishikawa和Kle細胞株中：未處理組CDH13和SHP1啟動子區(qū)處于完全甲基化狀態(tài)；5-Aza-CdR或TSA單獨處理后CDH13和SHP1啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)被部分逆轉(zhuǎn),同時RNA的表達量增加(p0.01)；5-Aza-CdR和TSA聯(lián)合處理組CDH13和SHP1啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)被完全逆轉(zhuǎn),且RNA水平顯著升高(p0.01)。(3)未處理組、5-Aza-CdR或TSA單獨或聯(lián)合處理組,UHRF1蛋白均能共沉淀PRMT5蛋白,與未處理組相比兩者的表達量明顯下調(diào)(p0.05)。結(jié)論：在子宮內(nèi)膜癌的兩個細胞株中,CDH13和SHP1基因啟動子區(qū)呈高甲基化狀態(tài)。CDH13的甲基化在EC的早期階段(包括復雜性增生和不典型增生)既已發(fā)生。UHRF1可以通過與PRMT5形成復合體來調(diào)控抑癌基因啟動子區(qū)甲基化的發(fā)生。
【關(guān)鍵詞】：子宮內(nèi)膜癌 抑癌基因 表觀遺傳學 DNA甲基化
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 中英文縮寫詞對照表10-11
• 前言11-20
• 1 表觀遺傳學概述12-18
• 2 表觀遺傳學改變治療藥物18-20
• 材料與方法20-39
• 1 臨床資料20-24
• 2 實驗方法及步驟24-39
• 結(jié)果39-41
• 討論41-43
• 結(jié)論43-44
• 附圖表44-49
• 參考文獻49-54
• 致謝54-55
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術(shù)論文目錄55-56
• 附件56

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本文編號：260932