【摘要】：研究背景子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis, EMS,簡(jiǎn)稱內(nèi)異癥)是子宮內(nèi)膜組織種植和生長(zhǎng)在子宮腔以外的一種慢性、雌激素依賴性的疾病。作為最為常見(jiàn)的婦科疾病之一,內(nèi)異癥在育齡期女性中的發(fā)病率為10%-15%,以慢性盆腔痛、痛經(jīng)、不孕為主要癥狀。高達(dá)35%-50%的慢性盆腔痛和不孕患者診斷為內(nèi)異癥,發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。大量的證據(jù)表明雌激素在異位病灶的建立和發(fā)展中起著重要的作用。然而,其發(fā)病機(jī)制尚不明確。主要的學(xué)說(shuō)和發(fā)病因素包括：(1)異位種植學(xué)說(shuō),包括經(jīng)血逆流學(xué)說(shuō)和淋巴和靜脈學(xué)說(shuō),經(jīng)血通過(guò)輸卵管進(jìn)入盆腔,76%～90%的生育期女性中存在經(jīng)血逆流的情況,但其中只有很少一部分女性發(fā)生內(nèi)異癥。此學(xué)說(shuō)不能解釋青春期、新生兒的內(nèi)異癥。(2)體腔上皮化生學(xué)說(shuō)及誘導(dǎo)學(xué)說(shuō),假設(shè)內(nèi)異癥是由內(nèi)臟和盆腔腹膜的間皮細(xì)胞化生而來(lái),卵巢激素和免疫因子可刺激體腔上皮分化而來(lái)的組織和未分化的腹腔組織向內(nèi)膜樣組織轉(zhuǎn)化。但由于青春期少女的雌激素水平是不高的,因此該學(xué)說(shuō)只可解釋部分的青春期的內(nèi)異癥；(3)苗勒氏管發(fā)育異常學(xué)說(shuō)；(4)遺傳因素,此學(xué)說(shuō)基于內(nèi)異癥有一定的家族聚集性,已發(fā)現(xiàn)異位組織中存在染色體異常和表觀遺傳修飾的異常；(5)氧化應(yīng)激和炎癥因素,脂蛋白的過(guò)氧化與內(nèi)異癥的病理有關(guān),導(dǎo)致異位組織的DNA損傷。過(guò)量的活性氧也會(huì)消除抗氧化物,從而不能清除異位內(nèi)膜；異位組織產(chǎn)生大量的巨噬細(xì)胞、前列腺素、細(xì)胞因子和趨化因子等；(6)其他學(xué)說(shuō)及因素,例如干細(xì)胞學(xué)說(shuō)和異位內(nèi)膜細(xì)胞凋亡抑制等。本病病因復(fù)雜,以上學(xué)說(shuō)均不能完全闡釋內(nèi)異癥的發(fā)病機(jī)制。內(nèi)異癥與癌癥之間的組織學(xué)聯(lián)系的假說(shuō)最早在1925年被提出。Sampson基于在顯微鏡下觀察組織,提出了上皮性卵巢癌起源于內(nèi)異癥,并描述了診斷內(nèi)異癥相關(guān)的卵巢癌的診斷標(biāo)準(zhǔn),包括(1)內(nèi)異癥鄰近腫瘤發(fā)生的部位的證據(jù)；(2)排除其他來(lái)源的腫瘤轉(zhuǎn)移；(3)子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞及其周圍的特征性的腔上皮腺體樣的組織的存在。Scottet在1953年補(bǔ)充了第四條診斷標(biāo)準(zhǔn),腫瘤組織中,存在內(nèi)異癥的良性改變向惡性改變轉(zhuǎn)變的組織學(xué)證據(jù)。如今,這四條標(biāo)準(zhǔn)仍然被用來(lái)定義內(nèi)異癥相關(guān)的惡性腫瘤(endometriosis-associated malignancy, EAM)。內(nèi)異癥是內(nèi)異癥相關(guān)的卵巢癌的癌前病變的一個(gè)有力的支持是,在異位的內(nèi)膜組織中發(fā)現(xiàn)了很多致癌基因與抑癌基因的突變。大量證據(jù)表明內(nèi)異癥與癌癥之間存在聯(lián)系,特別是透明細(xì)胞性卵巢癌。因此,異位內(nèi)膜中的腫瘤抑制因子和致癌因子表達(dá)的改變或許會(huì)導(dǎo)致異位組織的異常增殖。內(nèi)異癥被認(rèn)為是遺傳學(xué)的不穩(wěn)定,在內(nèi)異癥和卵巢癌中都能發(fā)現(xiàn)腫瘤抑制因子的基因突變,如PTEN,p53, bcl, ARID1A和TP53。越來(lái)越多的證據(jù)表明異常的表觀遺傳修飾在內(nèi)異癥的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要的作用,如DNA甲基化異常、microRNA表達(dá)以及組蛋白修飾。另外,在組蛋白去乙�；敢泊嬖诋惓５男揎棥3K27me3是研究較多的組蛋白化學(xué)修飾,可沉默基因轉(zhuǎn)錄及在干細(xì)胞分化和致癌中起一定的作用。Janice B及其團(tuán)隊(duì)的實(shí)驗(yàn)研究提出,在異位內(nèi)膜組織中存在著組蛋白3(H3)的甲基化水平升高,H3K4(組蛋白3賴氨酸4位)、H4K9和H3K27高甲基化、類固醇生成因子-1(SF1)的啟動(dòng)子乙�；�。內(nèi)異癥患者和對(duì)照組的分泌期子宮內(nèi)膜組蛋白3賴氨酸4位的三甲基化(H3K27me3)水平均升高。越來(lái)越多的證據(jù)表明,表觀遺傳修飾異常在子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機(jī)制的研究中扮演重要的角色。這些異常的表現(xiàn)包括DNA甲基化、microRNA表達(dá)和組蛋白修飾異常等。目前,解釋內(nèi)異癥相關(guān)的惡性腫瘤起源于內(nèi)異癥的主要有兩大理論。學(xué)者們通過(guò)大量的組織病理學(xué)研究后發(fā)現(xiàn), 內(nèi)異癥相關(guān)的卵巢癌(endometriosis-associated ovarian cancer, EAOC)可能來(lái)源于卵巢部位的不典型內(nèi)異癥。卵巢內(nèi)異癥的這種組織學(xué)異質(zhì)性表現(xiàn)為子宮內(nèi)膜腺體伴隨著異質(zhì)性的細(xì)胞學(xué)或非典型的鞋釘細(xì)胞。La Grenade和Silverberg在1988年首先提出不典型的內(nèi)異癥與卵巢癌之間有著直接聯(lián)系。在5例卵巢癌患者(其中包括3例透明細(xì)胞癌和2例子宮內(nèi)膜樣癌)中,其卵巢部位均存在不典型的內(nèi)異癥,其中4例的不典型內(nèi)異癥病灶鄰近所罹患的卵巢癌。此外,己被證明不典型的內(nèi)異癥患者發(fā)展為內(nèi)異癥相關(guān)的卵巢癌的風(fēng)險(xiǎn)顯著高于單純的內(nèi)異癥患者。雖然很多流行病學(xué)分析支持不典型內(nèi)異癥可能是一種癌前病變,并且也可在80%的內(nèi)異癥相關(guān)的卵巢癌中檢測(cè)出不典型的內(nèi)異癥,但這個(gè)結(jié)論仍然沒(méi)有得到足夠多的證據(jù)。一些研究提出,內(nèi)異癥與內(nèi)異癥相關(guān)的卵巢癌所在的微環(huán)境有著相似的介質(zhì)和細(xì)胞因子。但內(nèi)異癥相關(guān)的惡性腫瘤由異位內(nèi)膜細(xì)胞向惡性轉(zhuǎn)化是否通過(guò)它們的中間狀態(tài)——不典型內(nèi)異癥發(fā)展而來(lái)以及它們類似的微環(huán)境之間的聯(lián)系仍未被清楚闡明。內(nèi)異癥是具有惡性生物學(xué)行為的良性疾病,它有與惡性腫瘤相似的惡性生物學(xué)行為,如增殖侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的能力,異位內(nèi)膜可以粘附、侵入和破壞所在部位及其周圍的組織。但內(nèi)異癥并不像腫瘤那樣引起代謝的變化最終導(dǎo)致死亡。研究發(fā)現(xiàn),內(nèi)異癥患者的上皮性卵巢癌和透明細(xì)胞癌風(fēng)險(xiǎn)增加。FOXM1在上皮性卵巢癌中表達(dá)豐富并與低生存率和耐藥性有關(guān)。如今的治療方式可分為癥狀性的和有生育需要的治療,例如手術(shù)和常規(guī)的激素治療。所有的這些治療方式都是局限的,并且存在很多副反應(yīng)。然而,在這些治療中斷之后存在較高的復(fù)發(fā)率。叉頭轉(zhuǎn)錄因子(Forkhead Box M1,FOXM1)是在細(xì)胞增殖、分化和轉(zhuǎn)化過(guò)程中發(fā)揮重要作用的一種轉(zhuǎn)錄因子。作為在腫瘤形成的早期就被上調(diào)的蛋白,FOXM1已經(jīng)被證明在腫瘤的各個(gè)階段均起著重要作用。FOXM1在各種各樣的實(shí)體腫瘤和血液系統(tǒng)的腫瘤中都存在過(guò)表達(dá),如肝細(xì)胞癌、急性髓性白血病、胰腺癌和卵巢癌。Ras/MAPK(Ras, ERK). AKT和p38信號(hào)通路是在腫瘤中經(jīng)常被激活的通路,而這些通路也可以調(diào)節(jié)FOXM1的表達(dá)。噻唑類抗生素是轉(zhuǎn)錄因子FOXM1的小分子抑制劑,包括絲裂霉素A和硫鏈絲菌肽,都在多種腫瘤的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)中被證明有抗腫瘤活性。這些抑制劑可以抑制FOXM1的轉(zhuǎn)錄,有較高的特異性,而對(duì)其他的轉(zhuǎn)錄因子不會(huì)產(chǎn)生影響。硫鏈絲菌肽不僅是一個(gè)噻唑類抗生素,而且是一個(gè)蛋白酶體抑制劑,調(diào)節(jié)FOXM1的轉(zhuǎn)錄活性和表達(dá)。它能通過(guò)不同的信號(hào)通路在很多的腫瘤細(xì)胞中產(chǎn)生抗腫瘤的活性。Maqbool等在甲狀腺乳頭狀癌小鼠體內(nèi)移植模型中發(fā)現(xiàn),硫鏈絲菌肽通過(guò)抑帶FOXM1、MMP2和MMP9的表達(dá)抑制腫瘤的發(fā)展,而在體外實(shí)驗(yàn)中,硫鏈絲菌肽同時(shí)可以減少腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。在本研究中,我們研究FOXM1在內(nèi)異癥中的表達(dá),探討雌激素在ERK/FOXM1/MMP9信號(hào)通路中的作用機(jī)制。最后,在內(nèi)異癥大鼠模型中使用硫鏈絲菌肽治療異位病灶,以確定其下調(diào)FOXM1和MMP9的表達(dá)、促進(jìn)凋亡和減小異位病灶的能力,評(píng)估其療效。方法1、每天在固定的時(shí)間進(jìn)行大鼠陰道涂片,確定動(dòng)情周期。連續(xù)兩個(gè)動(dòng)情周期正常的大鼠納入本實(shí)驗(yàn)中。50只雌性Wistar大鼠通過(guò)自體皮下移植法建立內(nèi)異癥模型。2、4周后,所有大鼠進(jìn)行第二次開腹手術(shù)觀察異位病灶生長(zhǎng)情況,用游標(biāo)卡尺測(cè)量移植物的長(zhǎng)寬高(mm),用公式V=0.52*長(zhǎng)*寬水高,計(jì)算其體積。3、將造模成功的大鼠隨機(jī)分為去卵巢組和治療組,每組分別為20只與30只。去卵巢組大鼠經(jīng)手術(shù)去除卵巢后,進(jìn)一步隨機(jī)分為雌激素組和對(duì)照組。術(shù)后觀察3天,不給于任何治療。雌激素組的大鼠皮下注射雌激素(10ug/0.1ml/只／天),而對(duì)照組給予等劑量的芝麻油,每組皮下注射7天。治療組隨機(jī)分為150mg/kg硫鏈絲菌肽組、250mg/kg硫鏈絲菌肽組和對(duì)照組(等量生理鹽水),腹腔注射,兩天一次,共14天。4、用藥結(jié)束后,用游標(biāo)卡尺測(cè)量病灶體積。組織學(xué)染色證實(shí)造模成功,免疫染色檢測(cè)FOXM1在異位病灶中的定位和表達(dá)情況。Real-time PCR檢測(cè)mRNA的水平。Western blot檢測(cè)各組ERK/FOXM1/MMP9信號(hào)通路相關(guān)蛋白和Bcl-2的表達(dá)。結(jié)果1、組織病理學(xué)染色：第一次開腹手術(shù)28天后,組織病理學(xué)確認(rèn)造模成功。肉眼觀,所有造模組的內(nèi)膜組織均在腹壁發(fā)展為典型的異位內(nèi)膜病灶,半透明囊球狀結(jié)構(gòu)內(nèi)含淡黃或清亮無(wú)色液體,病灶表面及周圍有血管形成。組織學(xué)染色證實(shí)可見(jiàn)異位內(nèi)膜有與正常內(nèi)膜類似的子宮內(nèi)膜柱狀上皮細(xì)胞的腔樣結(jié)構(gòu)和與腺體。2、FOXM1的免疫學(xué)染色：免疫熒光染色顯示FOXM1主要定位在子宮內(nèi)膜的柱狀上皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)。雌激素組與其相對(duì)應(yīng)的對(duì)照組相比,FOXM1表達(dá)顯著升高,且主要表達(dá)在細(xì)胞核。3、FOXM1和MMP9的mRNA表達(dá)：熒光定量PCR結(jié)果顯示,雌激素組與對(duì)照組相比,FOXM1和MMP9基因表達(dá)升高(P0.05)。4、EKR/FOXM1/MMP9信號(hào)通路的蛋白印跡分析：蛋白印跡分析表明,雌激素組的磷酸化水平的ERK、FOXM1和MMP9表達(dá)水平均高于其相對(duì)應(yīng)的對(duì)照組。5、硫鏈絲菌肽治療內(nèi)異癥大鼠的療效評(píng)價(jià)：(1)治療前后移植物的體積：兩個(gè)治療組與對(duì)照組相比,硫鏈絲菌肽能使腹腔病灶體積明顯減小。從大體上看,各個(gè)治療組治療前體積無(wú)明顯差異(48.91±22.29mm3,150mg/kg TST治療組；45.01±16.37mm3,250mg/kg TST治療組；45.75±15.61 mm3,對(duì)照組；P0.05)。治療前后,對(duì)照組的異位移植物的體積并不存在顯著性差異(45.75±15.61 mm3 vs 36.09±19.46 mm3). 250mg/kg TST治療組異位移植物的體積從治療前的45.01±16.37 mm3減小到治療后的15.52±6.93 mm3(P0.01),與其他兩組相比,均有顯著性差異。另外,在給予150mg/kgTST治療后,異位病灶的體積與對(duì)照組相比,體積也有所減小差異有顯著性意義(23.37±13.65 mm3 vs 36.09±19.46 mm3; P 0.05)。(2) FOXM1和MMP9的蛋白表達(dá)：與對(duì)照組相比,硫鏈絲菌肽治療能顯著降低FOXM1的蛋白表達(dá)。治療后,三組之間兩兩比較,體積變小明顯,有顯著性差異(P0.05)。250mg/kg TST治療組的MMP9的蛋白表達(dá)顯著減少,與其余兩組比較差異有顯著性,但150mg/kg TST治療組與對(duì)照組之間無(wú)顯著性差異。硫鏈絲菌肽能通過(guò)減小病灶體積和降低FOXM1和MMP9的表達(dá),對(duì)內(nèi)異癥大鼠的異位病灶產(chǎn)生顯著的抑制活性。(3)抑制凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)：與對(duì)照組相比,150mg/kgTST組與250mg/kgTST組Bcl-2表達(dá)量降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩個(gè)治療組相比,Bcl-2的蛋白表達(dá)量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論1、FOXM1在雌激素組的異位內(nèi)膜中表達(dá)豐富,特別是異位子宮內(nèi)膜柱狀上皮細(xì)胞的細(xì)胞核。2、運(yùn)用雌激素作用后,ERK/FOXM1/MMP9信號(hào)通路蛋白表達(dá)升高,表明該通路可能參與了內(nèi)異癥的發(fā)生和發(fā)展。3、硫鏈絲菌肽可以減少內(nèi)異癥大鼠異位組織FOXM1和MMP9的表達(dá),且呈劑量依賴性,由此推斷硫鏈絲菌肽有望成為治療內(nèi)異癥的藥物之一。4、硫鏈絲菌肽下調(diào)抑制凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá),從而促進(jìn)異位病灶的凋亡。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R711.71

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 徐德標(biāo)，周善湘，周佩;國(guó)產(chǎn)硫鏈絲菌肽制備及體外抑菌試驗(yàn)的研究[J];上海預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;1995年11期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 江黎珠;FoxMl及其抑制劑在喉癌生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移中的作用及機(jī)制[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 陳曉菲;硫鏈絲菌肽治療子宮內(nèi)膜異位癥的療效觀察及機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

2 林力;硫鏈絲菌肽對(duì)人喉癌Hep-2細(xì)胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移能力的影響及FoxM1在其中的作用[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

，

本文編號(hào)：2574865