【摘要】：目的：胚胎植入子宮內(nèi)膜是妊娠建立的初始過程和胚胎持續(xù)發(fā)育的關(guān)鍵。胚胎植入及早期妊娠時,母胎界面位于與滋養(yǎng)層直接接觸的蛻膜上。人類的成功妊娠需要來自胎兒的滋養(yǎng)層細胞對子宮基質(zhì)的有節(jié)制地侵入。滋養(yǎng)細胞通過降解細胞外基質(zhì)使得其能夠浸潤生長,這一過程需要基質(zhì)金屬蛋白酶MMPs及其天然的抑制劑TIMPs處于一個平衡狀態(tài)。滋養(yǎng)細胞的侵入作用與其周圍環(huán)境有著密切的聯(lián)系,其中子宮蛻膜組織對其的影響尤為重要。然而,子宮蛻膜細胞對滋養(yǎng)細胞的遷移作用和具體分子過程還有待于進一步研究。本研究觀察蛻膜細胞條件培養(yǎng)液對滋養(yǎng)細胞遷移能力及相關(guān)調(diào)節(jié)基因(如MMPs、TIMPs等)表達的影響。 方法：我們利用原代培養(yǎng)細胞技術(shù),培養(yǎng)人蛻膜細胞以及人子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞,并對細胞進行免疫熒光染色,檢測細胞的上皮細胞分子標(biāo)記角蛋白(Cytokeratin,CK)和間質(zhì)細胞分子標(biāo)記波形蛋白(Vimentin),以確定原代培養(yǎng)是否成功。我們用收集到的兩種細胞的條件培養(yǎng)液(分別命名為DSC-CM和EMC-CM),對滋養(yǎng)細胞癌JAR分別進行預(yù)處理,通過Transwell比較兩種處理對滋養(yǎng)細胞遷移能力的作用,并通過Q-PCR和Western blot比較兩者的MMPs和TIMPs表達水平的區(qū)別。 結(jié)果：應(yīng)用細胞免疫熒光染色鑒定體外培養(yǎng)的蛻膜和子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞,我們發(fā)現(xiàn)95%以上的細胞為波形蛋白陽性,僅極少數(shù)細胞為角蛋白陽性細胞(5%以下),證明我們的原代培養(yǎng)確實得到了人蛻膜細胞和人子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞。Transwell結(jié)果顯示, DSC-CM處理組的滋養(yǎng)細胞穿出小室的細胞數(shù)大于EMC-CM處理組和空白組,我們的結(jié)果提示DSC-CM具有促進滋養(yǎng)細胞遷移的作用。Q-PCR結(jié)果顯示,DSC-CM處理組的滋養(yǎng)細胞MMP2和MMP9mRNA的表達水平顯著高于EMC-CM處理組；而TIMP1和TIMP2mRNA在兩組間無明顯差異。Western blot結(jié)果提示DSC-CM處理組的滋養(yǎng)細胞MMP2的表達高于EMC-CM處理組。 結(jié)論：結(jié)果顯示：與人子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞相比,早孕期蛻膜間質(zhì)細胞條件培養(yǎng)基DSC-CM能促進滋養(yǎng)細胞的遷移,并上調(diào)MMP9和MMP2的表達；而TIMP1和TIMP2mRNA表達變化不明顯；提示DSC-CM可能通過促進滋養(yǎng)細胞MMP2和MMP9的表達,從而促進細胞的遷移。
【圖文】：

浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文 文一結(jié)果3.結(jié)果3.1原代培養(yǎng)人蛻膜細胞以及人子宮內(nèi)膜細胞培養(yǎng)24小時后細胞貼壁達高峰，顯微鏡下觀察貼壁細胞形態(tài)，DSC多數(shù)呈梭形，少數(shù)呈三角形，細胞間平行或放射排列，細胞之間較獨立，，核呈圓形；EMC見有細胞呈漩禍排列致密細胞集落，梭形狀細胞插入性生長（圖1)

圖2.子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞和稅膜間質(zhì)細胞近95% Vimentin陽性EMC, Endometrium mesenchymal cell;DSC, Decidual stromal cell;BW, Black/white3.3 DSC-CM條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)滋養(yǎng)細胞形態(tài)改變細胞條件培養(yǎng)基處理滋養(yǎng)細胞JAR,誘導(dǎo)時間為48小時，觀察細胞形態(tài)的變化，提示與EMC-CM對照組相比，DSC-CM組細胞由連接緊密的卵圓形轉(zhuǎn)變?yōu)榉植妓缮⒌乃笮危▓D3)。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R711.71

【共引文獻】

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本文編號：2544231