【摘要】：目的檢測(cè)胎盤(pán)相關(guān)長(zhǎng)鏈非編碼RNA(placenta-related long noncoding RNA,prlncRNA)在子癇前期患者和正常孕婦胎盤(pán)和血漿中的表達(dá)水平,以評(píng)估其做為子癇前期(preeclampsia,PE)潛在生物標(biāo)記物的價(jià)值。方法1.本研究采用病例對(duì)照研究方法,入選的研究對(duì)象包括:(1)52例晚發(fā)型子癇前期(late-onset PE,LOPE)患者,該組孕婦于妊娠34周后發(fā)病并明確診斷;52例孕齡相匹配的健康孕婦做為對(duì)照組(control group 1)。(2)58例早發(fā)型子癇前期(early-onset PE,EOPE)患者,該組孕婦妊娠滿(mǎn)20周,并于妊娠34周前明確診斷;58例孕齡相匹配的正常對(duì)照組孕婦(control group 2)。(3)30例與上述各組孕婦年齡相匹配的健康非妊娠婦女。2.應(yīng)用lncRNA基因芯片方法檢測(cè)LOPE患者胎盤(pán)組織中異常表達(dá)的lncRNA。根據(jù)基因芯片的結(jié)果對(duì)目標(biāo)lncRNA進(jìn)行初步篩選,最終篩選出9個(gè)異常表達(dá)的lncRNA進(jìn)行定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶聯(lián)反應(yīng)(quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,qRT-PCR)驗(yàn)證。3.應(yīng)用基因本體(Gene Ontology,GO)和京都基因及基因組百科(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)分析的方法探討胎盤(pán)組織中差異表達(dá)的lncRNA生物學(xué)功能及其在PE發(fā)病中的病理機(jī)制。4.應(yīng)用qRT-PCR的方法檢測(cè)PE(LOPE和EOPE)患者與其正常對(duì)照組孕婦血漿中prlncRNA的表達(dá)水平。分析血漿和胎盤(pán)組織中l(wèi)ncRNA表達(dá)水平的相關(guān)性,并評(píng)估循環(huán)胎盤(pán)相關(guān)lncRNA(circulating placenta-related long noncoding RNA,cprlncRNA)做為生物標(biāo)記物檢測(cè)PE的潛在應(yīng)用價(jià)值。5.采用原位雜交(in situ hybridization,ISH)的方法確定prlncRNA在胎盤(pán)組織中的具體表達(dá)部位,進(jìn)一步揭示其在PE發(fā)病中可能起到的生物學(xué)作用及做為生物標(biāo)記物監(jiān)測(cè)PE的潛在價(jià)值。結(jié)果1.用基因芯片分析的方法,一個(gè)發(fā)現(xiàn)163個(gè)prlncRNA在LOPE患者胎盤(pán)組織中異常表達(dá),并且發(fā)現(xiàn)它們中的一些可能參與了PE的發(fā)病機(jī)制。2.prlncRNA NONHSAT116812和NONHSAT145880在孕婦的血漿中也能檢測(cè)得到,并且與其胎盤(pán)組織中的表達(dá)水平呈正相關(guān)。3.與正常孕婦相比,PE患者血漿中prlncRNA NONHSAT116812表達(dá)水平明顯降低,而NONHSAT116812明顯升高。這兩個(gè)cprlncRNA對(duì)EOPE和LOPE均具有高的識(shí)別效率。4.prlncRNA NONHSAT116812和NONHSAT116812主要表達(dá)于胎盤(pán)絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞及絨毛內(nèi)血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞。結(jié)論胎盤(pán)組織中異常表達(dá)的lncRNA可能在PE的發(fā)病機(jī)制中起到部分或者關(guān)鍵的作用,并且prlncRNA可以釋放入血液循環(huán)。更重要的是cprlncRNA,特別是NONHSAT116812和NONHSAT145880具有較高識(shí)別LOPE和EOPE的能力,具有潛在的生物標(biāo)記物應(yīng)用價(jià)值。本研究為臨床進(jìn)一步前瞻性研究cprlncRNA做為生物標(biāo)記物預(yù)測(cè)和監(jiān)測(cè)PE的應(yīng)用打下了基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R714.244

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本文編號(hào)：2524226