【摘要】：目的：檢測卵巢儲備功能降低女性顆粒細(xì)胞Gremlinl (GREM1) mRNA表達(dá)水平,分析Gremlin表達(dá)量與體外受精與胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer, IVF-ET)結(jié)局的關(guān)系,并進(jìn)一步探討GREM1參與調(diào)控卵丘顆粒細(xì)胞擴(kuò)展從而影響卵巢儲備功能。 方法：選取2013年9月-2014年01月在浙江大學(xué)附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院生殖中心因輸卵管因素不孕而行常規(guī)IVF治療的不孕癥患者44例,年齡20-37歲。取卵當(dāng)日收集患者取卵當(dāng)日靜脈血,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測定血清抗苗勒管激素(anti Mulerian hormone,AMH)水平。卵巢儲備功能下降組的納入標(biāo)準(zhǔn)是：1.血清抗苗勒管激素(anti Mulerian hormone, AMH)1.1ng/ml;2.基礎(chǔ)卵泡刺激素(follicle stimulating hormone, FSH10IU/L;3.基礎(chǔ)雌二醇(estradiol, E2≥80pg/ml)且竇卵泡數(shù)(antral follicle number,AFC)≤5。符合上述3條中的1條。卵巢儲備功能正常組的納入標(biāo)準(zhǔn)是：LAMH2.0ng/ml;2.基礎(chǔ)FSH10IU/L;3.基礎(chǔ)E280pg/ml且基礎(chǔ)AFC5。同時符合上述3條。留取取卵當(dāng)日所有的卵泡穿刺液用Fiocll梯度離心法分離顆粒細(xì)胞,采用定量Real-time PCR檢測卵巢儲備功能降低患者顆粒細(xì)胞GREM1mRNA的表達(dá)量及與卵丘顆粒細(xì)胞擴(kuò)展相關(guān)的hyaluronan synthase2(HAS2)、tumor necrosis factor alpha-induced protein6(TNFAIP6)、pentraxin3(PTXS)和prostaglandin synthase2(PTGS2)的mRNA表達(dá),詳細(xì)記錄患者臨床一般資料及使用促性腺激素的累計(jì)劑量、卵泡數(shù)、獲卵數(shù)、受精率、卵裂率及胚胎移植情況,并隨訪患者妊娠情況。在體外實(shí)驗(yàn)中,在KGN細(xì)胞的培養(yǎng)基中加入卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)和重組人Gremlin蛋白,分別作用0小時、4小時、6小時和24小時,用定量Real-time PCR檢測HAS2、TNFAIP6、PTX3和PTGS2的mRNA表達(dá)量。引入SMAD2/3信號通路抑制劑SB431542,與FSH和重組人Gremlin蛋白共同作用于KGN細(xì)胞,檢測抑制劑SB431542對HAS2、TNFAIP6、PTX3和PTGS2的表達(dá)量的影響。所有數(shù)據(jù)用SPSS16.0for windows軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。 結(jié)果：1.卵巢儲備功能降低患者顆粒細(xì)胞GREM1mRNA表達(dá)水平顯著低于卵巢儲備功能正常者；2.顆粒細(xì)胞GREM1mRNA表達(dá)水平與基礎(chǔ)FSH及FSH/LH負(fù)相關(guān)(p0.05);3.卵巢儲備功能降低患者顆粒細(xì)胞HAS2.TNFAIP6、PTX3和PTGS2的mRNA表達(dá)水平顯著低于卵巢儲備功能正常者；4.在KGN細(xì)胞培養(yǎng)基中加入重組人Gremlin可顯著提高HAS2、TNFAIP6、PTX3和PTGS2的mRNA表達(dá)水平,且具有時間依賴性,4小時或6小時時表達(dá)都顯著上升；6.在培養(yǎng)基中同時加入SB431542后,HAS2的mRNA表達(dá)水平下降,而TNFAIP6和PTGS2的mRNA表達(dá)水平?jīng)]有顯著變化。 結(jié)論：1.顆粒細(xì)胞3REM1表達(dá)水平下降與年輕女性卵巢儲備功能降低相關(guān)；2.顆粒細(xì)胞GREM1mRNA表達(dá)水平與基礎(chǔ)FSH及FSH/LH負(fù)相關(guān)；3.卵巢儲備功能下降的患者卵丘顆粒細(xì)胞擴(kuò)展過程受阻；4.顆粒細(xì)胞GREM1參與調(diào)節(jié)卵丘顆粒細(xì)胞擴(kuò)展的過程,卵巢儲備功能降低患者的顆粒細(xì)胞GREM1表達(dá)下降,卵丘顆粒細(xì)胞擴(kuò)展過程受阻,是卵巢儲備功能降低發(fā)生的機(jī)制之一；5.GREM1通過SMAD2/3信號通路調(diào)控HAS2的表達(dá)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R714.8

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本文編號：2279730