本文選題：卵巢癌 + Genistein��； 參考：《河北醫(yī)科大學》2014年碩士論文

【摘要】：目的：在婦科惡性腫瘤中死亡率最高的當屬卵巢癌。因其發(fā)生發(fā)展具有隱匿性的特點，約70%的患者在發(fā)現(xiàn)時已屬于晚期（FIGO分期IIB-IV期），其五年生存率不到40%[1]。腫瘤減滅術(shù)聯(lián)合術(shù)后化療成為卵巢癌治療的標準方案。靜脈化療復發(fā)率較高，腹腔化療可以延長無瘤生存期并延長總生存率，但其毒副作用較大，其應用受到限制，因此，尋找低毒有效抗癌制劑成為當前卵巢癌治療研究的重要課題。 大豆中天然存在的黃酮類化合物主要有3種，即大豆甙類（daidzin）、染料木甙類（genistin）、黃豆甙類（glycitin），其中又以染料木黃酮（genistein）含量最多，活性最強，其化學名為4,5,7-三羥基異黃酮。研究表明genistein具有多種生物學活性，如雌激素樣作用、抗雌激素樣作用、抗氧化和調(diào)節(jié)細胞周期等，近年來因其顯著的防癌抗癌效果而倍受關(guān)注。然而genistein水溶性差，口服吸收效率較低。在絕大多數(shù)的體內(nèi)外實驗中通常利用二甲基亞砜（DMSO）進行溶解，但是DMSO對細胞的毒副作用不可忽視，不僅影響實驗效果，而且也限制藥物的臨床應用。羥丙基-β-環(huán)糊精是一種無毒、刺激性小、可以供靜脈注射的輔料。經(jīng)羥丙基-β-環(huán)糊精包合后的黃酮類化合物，增強了藥物的生物利用度，改善了溶解度及穩(wěn)定性。近年來研究發(fā)現(xiàn)microRNAs是腫瘤形成過程的重要參與者，人類多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展與microRNAs的異常表達有關(guān)，扮演著癌基因與抑癌基因的角色。本課題以人卵巢上皮性癌裸鼠皮下移植瘤為研究對象，利用羥丙基-β-環(huán)糊精包合的genistein，探討Genistein對人上皮性卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用及其對PTEN蛋白和microR-21的影響，為Genistein在上皮性卵巢癌的臨床治療及預防中的應用提供理論依據(jù)。 方法： 1細胞培養(yǎng)：人卵巢癌細胞SKOV3細胞，培養(yǎng)在含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中，培養(yǎng)箱為溫度為37℃，含5%CO2。 2裸鼠移植瘤模型的建立及實驗分組：實驗動物為BALB/C/nu/nu無胸腺裸小鼠，5～6周齡，18-22g，雌性，在SPF級環(huán)境下飼養(yǎng)。常規(guī)無菌培養(yǎng)SKOV3細胞，當細胞長至對數(shù)期時，用0.25%胰酶對細胞進行消化，離心，配制成2.5×107個/ml單細胞懸液，在無菌條件下接種于裸鼠背部近前肢處的皮下，每只裸鼠接種0.2ml（即5×106個細胞）單細胞懸液。觀察移植瘤生長情況，種瘤第7天選出移植瘤接種成功，并且移植瘤直徑在4～7mm的的裸鼠進行試驗，將選出的裸鼠隨機分成六組:對照組（輔料組）順鉑組，Genistein包合物低劑量組，順鉑+Genistein包合物低劑量組，Genistein包合物中劑量組，Genistein包合物高劑量組，每組6只。 3實驗藥物的制備：Genistein包合物、輔料、順鉑均由0.9%氯化鈉注射液配制成所需濃度，即刻使用。 4給藥方法：Genistein包合物含genistein的濃度為6%，用藥中低、中、高劑量分別按含genistein量50mg/kg、150mg/kg、450mg/kg腹腔注射，每天一次，連續(xù)3周；對照組（輔料組）按Genistein包合物低劑量組所含羥丙基β-環(huán)糊精量進行腹腔注射，每天一次，連續(xù)3周，順鉑組按3mg/kg腹腔注射，每天一次，連用7天，3周后處死；Genistein包合物低劑量+順鉑組同兩藥單獨給藥方法。 5裸鼠重量及移植瘤體積和重量的測量：從種瘤后開始每天觀察裸鼠精神狀態(tài)、飲食、大便、活動及生長等情況。治療前測裸鼠體重，移植瘤的最長徑（a）和最短徑（b），治療后，每周測量裸鼠體重，移植瘤的最長徑（a）和最短徑（b），并按公式V（mm3）=πab2/6計算移植瘤體積。停藥24小時終止觀察，脫頸法處死裸鼠，剝?nèi)×鼋M織，并稱重。計算腫瘤抑瘤率IR（%）=（1－治療組腫瘤平均瘤重/對照組中平均瘤重）×100%。 6免疫組織化學染色檢測移植瘤組織中PTEN蛋白的表達情況。 7用RT-qPCR技術(shù)檢測移植瘤組織中microR-21、PTEN mMRA的表達。 8統(tǒng)計學方法：采用SPSS19.0統(tǒng)計學軟件對實驗數(shù)據(jù)進行處理。等級資料按秩轉(zhuǎn)換多個獨立樣本比較的Student-Newman-kelus檢驗，計量資料以析因設(shè)計和單因素方差分析進行檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。 結(jié)果： 1給藥過程順利，順鉑組及聯(lián)合用藥組裸鼠出現(xiàn)消瘦、精神狀態(tài)較差，隨著周齡的增加，體重有下降趨勢，且與對照組相比差異均有統(tǒng)計學意義。其余各組裸鼠體重均有所增長，但與對照組相比，差異無統(tǒng)計學意義。在開始給藥時，各組移植瘤體積無統(tǒng)計學差異，隨時間延長各組瘤體積均逐漸增大，給藥第22天各組移植瘤平均體積均比對照組小。處死裸鼠后各組抑瘤率分別為：聯(lián)合用藥組＞順鉑組＞Genistein包合物低劑量組；genistein包合物高劑量組＞中劑量組＞低劑量組。順鉑和genistein包合物雖然都能抑制腫瘤生長，但是順鉑和genistein包合物并無明顯的協(xié)同作用。 2裸鼠移植瘤組織中PTEN蛋白表達情況：各劑量genistein包合物均能增加PTEN蛋白表達，與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義，但是順鉑組對PTEN蛋白表達則無明顯影響，聯(lián)合組統(tǒng)計結(jié)果顯示genistein包合物與順鉑對PTEN蛋白表達無協(xié)同作用；與PTEN蛋白相對應的PTENmRNA結(jié)果也有上述規(guī)律。 3裸鼠移植瘤組織中miR-21的表達情況：各劑量genistein包合物均能降低miR-21的表達，與對照組相比差異均有統(tǒng)計學意義，但是順鉑組對miR-21的表達則無明顯影響，聯(lián)合組統(tǒng)計結(jié)果顯示genistein包合物與順鉑對miR-21的表達無協(xié)同作用，說明順鉑不能降低miR-21的表達。 結(jié)論： 1順鉑與Genistein包合物均具有抑制腫瘤生長的作用，并隨genistein劑量增大抑制作用也增強，聯(lián)合用藥比單獨用藥組均能增加對腫瘤生長的抑制，但統(tǒng)計學分析差異并無顯著性，可能與樣本量較小有關(guān)。 2Genistein包合物可明顯增加PTEN蛋白的表達，，并呈現(xiàn)劑量依賴性，但順鉑對PTEN蛋白表達無明顯影響，且聯(lián)合用藥也無明顯協(xié)同作用。 3Genistein各劑量均可以抑制miR-21的表達，增加PTEN mRNA的表達，且表現(xiàn)為劑量依賴性，但順鉑對miR-21及PTEN mRNA的表達無明顯影響，且聯(lián)合用藥也無明顯協(xié)同作用。
[Abstract]:Objective : In the case of ovarian cancer with the highest mortality in gynecological malignant tumors , about 70 % of patients with advanced stage ( FIGO stage IIB - IV ) were found to have a 5 - year survival rate of less than 40 % . Chemotherapy is a standard protocol for ovarian cancer treatment . The recurrence rate of intravenous chemotherapy is high , intraperitoneal chemotherapy can prolong the survival time without tumor and prolong the overall survival rate , but its toxic side effect is large and its application is limited . Therefore , it is an important topic to search for low - toxic and effective anti - cancer agents to be used in the treatment of ovarian cancer .

The study shows that genistein has many biological activities such as estrogen - like action , anti - estrogen - like action , anti - oxidation and regulation of cell cycle .

Method :

1 Cell culture : Human ovarian cancer cell SKOVCs were cultured in RPMI - 1640 medium containing 10 % fetal bovine serum , and the incubator was incubated at 37 鈩

本文編號：2091383