發(fā)布時間：2018-06-26 05:16

  本文選題：豚鼠 + 卵巢�。� 參考：《南京農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：多囊卵巢綜合癥(PCOS)是育齡婦女最為常見的內(nèi)分泌紊亂疾病,是急待解決的臨床問題之一。當(dāng)前認為卵巢才是PCOS病理機制改變的原發(fā)部位。PCOS的主要特征是高雄激素癥,高雄激素抑制了卵巢發(fā)育卵泡的成熟,并最終導(dǎo)致了卵巢囊狀表現(xiàn)的出現(xiàn)。PCOS病因和病理機制至今尚未完全闡明,因此,動物模型對于進一步揭示PCOS的發(fā)情機制以及評估PCOS的治療手段都顯得極其重要。已有多種處理方法被用于介導(dǎo)PCOS嚙齒類動物模型,如雄激素處理、雌激素處理、芳香化酶抑制劑處理、抗孕酮劑(如米非司酮)、持續(xù)光照或基因改造等。目前多種不同的實驗動物已被用模擬人類PCOS繁殖和代謝癥狀,這其中包括非人類靈長類動物、大鼠、小鼠和綿羊。嚙齒類動物卵巢激素分泌情況與人類不盡相同,而獼猴和綿羊等作為實驗動物又過于昂貴。豚鼠作為人類生殖研究的良好模型,由于其發(fā)情周期與人類似,且成本低廉易操作,其作為PCOS模型動物具有比較大的潛力。基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)參與了卵巢細胞遷移、細胞增殖、凋亡和組織形態(tài)發(fā)生的過程,因為卵巢的基本功能就是分泌激素和排卵,由此需要動態(tài)的、廣泛的和周期性的組織再造。MMP-2和MMP-9參與了卵巢周期卵泡發(fā)育、排卵、黃體的形成和退化的過程。同時,基質(zhì)金屬蛋白酶/基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑(MMPs/TIMPs)的平衡紊亂可能是引起卵巢病變的原因之一,因為PCOS的卵巢MMPs/TIMPs平衡是失調(diào)的。因此研究MMP-2和MMP-9對于調(diào)控卵巢周期的表達特性對闡明PCOS的病理機制有著重要的意義。本論文以豚鼠為研究對象,重點研究豚鼠卵巢周期和豚鼠不同生長階段卵巢上MMP-2和MMP-9的表達特性,以及研究豚鼠在經(jīng)不同處理方法(eCG、丙酸睪酮、來曲唑)處理后卵巢MMP-2和MMP-9的表達特性。主要結(jié)果如下:1.豚鼠發(fā)情周期卵巢MMP-2、9表達特性為研究正常成年雌性豚鼠發(fā)情周期中卵巢上MMP-2和MMP-9的表達特性,通過觀察豚鼠陰門外觀和陰道脫落細胞涂片,確定豚鼠的發(fā)情周期。使用連續(xù)觀察到2個以上正常發(fā)情周期的豚鼠,分別取處于發(fā)情前期和發(fā)情后期的豚鼠(n=6),采集豚鼠的卵巢,通過HE染色和IHC染色(StAR、MMP-2和MMP-9)并觀察其表達特性。結(jié)果顯示,MMP-2,-9和StAR在發(fā)情前期豚鼠卵巢的閉鎖卵泡的顆粒細胞和卵泡膜細胞上有明顯表達,而它們在發(fā)情后期豚鼠卵巢黃體上也有強表達。2.初生豚鼠經(jīng)eCG處理卵巢MMP-2、9表達特性采取3日齡和8日齡初生豚鼠分別注射5 IU eCG和生理鹽水(n=6),2天后采集豚鼠卵巢,通過HE和IHC染色觀察eCG對初生豚鼠卵巢的作用。結(jié)果顯示,3日齡、5日齡、10日齡正常豚鼠卵巢上卵泡形態(tài)變化明顯,有腔卵泡的數(shù)量呈逐漸增多趨勢,10日齡豚鼠上可見大的有腔閉鎖卵泡。初生豚鼠卵巢對激素已有較強敏感性,eCG對初生豚鼠卵巢的卵泡發(fā)育沒有起到類似FSH的促卵泡作用,而是發(fā)揮了類似LH的作用。MMP-2和MMP-9通過參與細胞增殖和組織形態(tài)發(fā)生過程參與了初生豚鼠卵巢卵泡的發(fā)育,而MMP-2和MMP-9對eCG可能具有不同的敏感性或發(fā)揮不同功能。3.豚鼠經(jīng)丙酸睪酮處理卵巢MMP-2、9表達特性18只正常發(fā)情期豚鼠隨機分為3組(n=6):T-1組豚鼠每天注射1 mg/100 g體重的TP(28天),T-2組豚鼠每天注射2 mg/100 g體重的TP(28天),對照組注射生理鹽水。試驗結(jié)束后檢測豚鼠血清睪酮、孕酮、雌二醇和濃度,卵巢切片進行HE和IHC染色,觀察卵巢上StAR、PCNA、MMP-2和MMP-9的表達特性。結(jié)果表明,豚鼠經(jīng)28天連續(xù)TP注射后,豚鼠血清睪酮濃度隨注射量的增加而大幅度提升,引起豚鼠持續(xù)不排卵。豚鼠經(jīng)一定劑量丙酸睪酮注射可模擬了人類PCOS的2大生殖特征:無排卵和高雄激素癥。另外,經(jīng)高劑量丙酸睪酮注射豚鼠可能是人類PCOS自我恢復(fù)良好的動物模型。MMP-2、MMP-9共同參與了豚鼠卵巢上卵泡的生長及閉鎖過程,豚鼠卵巢上有腔閉鎖卵泡的增多可能與MMP-2的高表達有關(guān)。4.豚鼠經(jīng)來曲唑處理卵巢MMP-2、9表達特性豚鼠每日灌服1 mg/kg和2 mg/kg來曲唑,對照組灌服生理鹽水(n=6,21天和28天)。試驗結(jié)束后測定豚鼠血清睪酮、孕酮和雌二醇濃度,豚鼠卵巢切片經(jīng)HE、IHC染色(StAR、PCNA、MMP-2和MMP-9)及明膠酶譜分析。結(jié)果顯示,經(jīng)來曲唑處理豚鼠血清睪酮濃度隨來曲哇使用劑量和處理時間的增加而提高,而雌二醇和孕酮濃度則相反。豚鼠經(jīng)來曲唑處理卵巢未見黃體,即來曲唑抑制了豚鼠卵巢排卵,處理后卵巢上有腔卵泡數(shù)量隨來曲唑使用劑量和處理時間的增加而增多�；钚訫MP-2和MMP-9通過在有腔卵泡顆粒細胞層和卵泡膜細胞層的表達,廣泛的參與了豚鼠經(jīng)來曲唑處理后卵巢多囊的生成過程�？傊�,MMP-2和MMP-9都參與了豚鼠卵巢的形態(tài)變化,MMP-2和MMP-9在初生豚鼠卵巢上對eCG具有不同反應(yīng)性,豚鼠經(jīng)丙酸睪酮和來曲唑誘導(dǎo)后卵巢有腔卵泡的增多伴隨卵巢MMP-2表達的增強和MMP-9表達的減弱。
[Abstract]:This paper studies the expression of MMP - 2 and MMP - 9 in women with PCOS . The levels of serum testosterone , MMP - 2 and MMP - 9 in guinea pigs were studied by HE , IHC staining in guinea pigs ( n = 6 , 21 days and 28 days ) .
【學(xué)位授予單位】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R711.75

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本文編號：2069274