本文選題：卵巢癌 + 干細(xì)胞�。� 參考：《大連醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：背景:卵巢癌是婦科三大惡性腫瘤之一,在我國(guó)的發(fā)病率居第三位,目前卵巢癌是婦科腫瘤中死亡率最高的惡性腫瘤[1]。造成卵巢癌高死亡率的主要原因是由于70%的患者診斷時(shí)都已是中晚期,這些患者又會(huì)有70%以上出現(xiàn)腫瘤的復(fù)發(fā);并且很多患者發(fā)生耐藥復(fù)發(fā)而最終導(dǎo)致死亡[2]。近年來相關(guān)研究提出了卵巢癌干細(xì)胞的觀點(diǎn),認(rèn)為卵巢癌干細(xì)胞的存在可能是卵巢癌耐藥復(fù)發(fā)的重要因素之一,干細(xì)胞的存在增強(qiáng)了腫瘤的形成能力與耐藥性[3]。迄今為止,卵巢癌干細(xì)胞的研究一直具有挑戰(zhàn)性,如何鑒定這類具有特殊生物學(xué)行為的細(xì)胞群成為目前干細(xì)胞研究的重點(diǎn)和難點(diǎn);所以尋找到不同腫瘤干細(xì)胞表面表達(dá)的不同生物標(biāo)記物成為鑒定干細(xì)胞的重要方法之一。目前關(guān)于卵巢癌干細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記物的研究主要有CD133、CD24、CD44、CD117和ALDH1等。相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道顯示[4],目前CD133、CD44以及CD117已被廣泛認(rèn)為是卵巢癌干細(xì)胞的特異性標(biāo)記物,而CD24及ALDH1并沒有明確定論。ALDH1在許多實(shí)體瘤中已經(jīng)被認(rèn)為是腫瘤干細(xì)胞的標(biāo)記物,而在卵巢癌干細(xì)胞中卻尚無定論,但是目前在部分人類卵巢癌組織與細(xì)胞系中都能檢測(cè)到ALDH1的表達(dá),并且在卵巢癌細(xì)胞系中,ALDH1表達(dá)的細(xì)胞更具有化學(xué)藥物抵抗性,與ALDH1陰性細(xì)胞相比,ALDH1表達(dá)的腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)更快[5]。所以ALDH1是否也能夠和CD133一樣成為卵巢癌干細(xì)胞的特異性標(biāo)記物,成為目前研究的熱點(diǎn)。目前研究干細(xì)胞常用的實(shí)驗(yàn)方法是無血清培養(yǎng)法誘導(dǎo)培養(yǎng)具有干細(xì)胞特性的懸浮細(xì)胞球,因此本實(shí)驗(yàn)通過該方法培養(yǎng)具有干細(xì)胞特性的懸浮細(xì)胞球,采用免疫熒光檢測(cè)懸浮細(xì)胞球中CD133、ALDH1的表達(dá)情況,與細(xì)胞系比較二者表達(dá)的差異,從而初步推斷ALDH1能否成為卵巢癌干細(xì)胞的標(biāo)記物。目的:從細(xì)胞系及耐藥細(xì)胞株中通過無血清法培養(yǎng)出懸浮細(xì)胞球,即卵巢癌干細(xì)胞;檢測(cè)CD133、ALDH1在懸浮細(xì)胞球與細(xì)胞系、耐藥細(xì)胞株中的表達(dá)情況,推斷ALDH1能否與CD133一致成為卵巢癌干細(xì)胞有優(yōu)勢(shì)的標(biāo)記物。方法:選擇卵巢癌細(xì)胞系SKOV3、Hey-A8、OVCAR-8,篩選出成球較好的細(xì)胞系。并建立其耐藥細(xì)胞株Hey-A8-DDP、OVCAR-8-DDP。用Western-blot的方法檢測(cè)卵巢癌細(xì)胞系Hey-A8、OVCAR-8及耐藥株Hey-A8-DDP、OVCAR-8-DDP中CD133、ALDH1的表達(dá)。將卵巢癌細(xì)胞系Hey-A8、OVCAR-8及耐藥細(xì)胞株Hey-A8-DDP、OVCAR-8-DDP通過無血清培養(yǎng)法誘導(dǎo)培養(yǎng)懸浮細(xì)胞球。采用免疫熒光染色法分別檢測(cè)細(xì)胞系和耐藥細(xì)胞株培養(yǎng)出來的懸浮細(xì)胞球CD133、ALDH1的表達(dá),并且與細(xì)胞系比較二者表達(dá)的差異。結(jié)果:1.卵巢癌細(xì)胞系Hey-A8和OVCAR-8及其耐藥細(xì)胞株Hey-A8-DDP、OVCAR-8-DDP通過無血清培養(yǎng)法成功培養(yǎng)出懸浮球細(xì)胞,觀察至第8天,與細(xì)胞系Hey-A8、OVCAR-8相比,其對(duì)應(yīng)的耐藥細(xì)胞株的懸浮細(xì)胞球體積更大,形態(tài)更規(guī)則,成球性更強(qiáng)。2、卵巢癌耐藥細(xì)胞株Hey-A8-DDP中ALDH1的表達(dá)較卵巢癌細(xì)胞系Hey-A8高。卵巢癌細(xì)胞系OVCAR-8及耐藥細(xì)胞株OVCAR-8-DDP中ALDH1無明顯表達(dá);上述細(xì)胞系及耐藥細(xì)胞株均未檢測(cè)到CD133的表達(dá)。3、卵巢癌細(xì)胞系Hey-A8、OVCAR-8及其耐藥細(xì)胞株Hey-A8-DDP、OVCAR-8-DDP培育出的懸浮細(xì)胞球經(jīng)免疫熒光染色后,CD133、ALDH1均明顯表達(dá),而在兩種耐藥細(xì)胞株的懸浮細(xì)胞球中二者均超過相對(duì)應(yīng)的細(xì)胞系而呈更高表達(dá);同時(shí)CD133、ALDH1在OVCAR-8細(xì)胞系及耐藥細(xì)胞株OVCAR-8-DDP中及其細(xì)胞球的差別的更為明顯。結(jié)論:1、卵巢癌細(xì)胞系Hey-A8和OVCAR-8及耐藥細(xì)胞株Hey-A8-DDP、OVCAR-8-DDP中均篩選出卵巢癌干細(xì)胞,且在耐藥細(xì)胞株中卵巢癌干細(xì)胞更為富集,從而推斷卵巢癌干細(xì)胞的存在是卵巢癌耐藥復(fù)發(fā)的重要原因之一。2、ALDH1在培育出的能夠代表卵巢癌干細(xì)胞的懸浮細(xì)胞球中高表達(dá),而在細(xì)胞系與耐藥細(xì)胞株中部分表達(dá)或不表達(dá),提示ALDH1可能與CD133一樣,成為卵巢癌干細(xì)胞有意義的生物學(xué)標(biāo)記物。3、CD133、ALDH1在所有培育出的懸浮細(xì)胞球中均共同高表達(dá),二者聯(lián)合檢測(cè),可增加卵巢癌干細(xì)胞篩選的成功率。
[Abstract]:Background : Ovarian cancer is one of the three major malignant tumors of gynecology . In China , the incidence of ovarian cancer is the third , and ovarian cancer is one of the most common malignant tumors in gynecological tumors . The primary cause of high mortality in ovarian cancer was that 70 % of patients were diagnosed with late middle and late stages , with more than 70 % of these patients experiencing recurrent tumor recurrence , and many patients experienced drug - resistant relapse and eventually led to death . In recent years , the research of ovarian cancer stem cells suggests that the presence of ovarian cancer stem cells may be one of the most important factors in ovarian cancer recurrence , and the presence of stem cells enhances the formation and drug resistance of ovarian cancer cells . So far , the research of ovarian cancer stem cells has been challenging . How to identify these cells with special biological behavior has become the focus and difficulty of stem cell research . The expression of CD133 and ALDH1 in ovarian cancer cell lines were investigated by means of immunofluorescence staining . The ovarian cancer stem cells were screened from OVCAR - 8 - DDP , and the ovarian cancer stem cells were more enriched in the drug resistant cell lines .
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R737.31

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1 鄭智國(guó);高

本文編號(hào)：2025483