本文選題：孕酮 + 胚胎著床率�。� 參考：《浙江大學》2014年博士論文

【摘要】：第一部分IVF刺激周期中注射hCG日及注射hCG次日血清孕酮濃度對胚胎著床率的影響 目的： 已知注射hCG日孕酮濃度對IVF胚胎著床率有預測價值,然而,注射hCG次日的血清孕酮濃度對IVF胚胎著床率是否也有預測價值呢?與注射hCG日孕酮濃度相比,其預測價值相對較低?相同?或更高? 方法： 本研究為單中心、回顧性、觀察性隊列研究。研究對象為自2011年1月～2013年5月間于浙江大學醫(yī)學院附屬邵逸夫醫(yī)院生殖中心接受IVF治療的全部5828個卵巢刺激周期的臨床資料。研究期間,本中心的鮮胚移植策略：僅患者獲卵數(shù)≤15枚,注射hCG日孕酮"f2.0ng/ml,且無卵巢過度刺激(ovarian hyperstimulation syndrome, OHSS)傾向等條件均同時滿足的前提下,方可進行新鮮胚胎移植。否則,建議患者全部新鮮胚胎冷凍,擇期行凍融胚胎移植。 研究期間,所有患者均于注射hCG日及注射hCG次日清晨采取血樣檢測血清雌二醇濃度和孕酮濃度。研究期間均使用同樣的血清性激素檢測試劑盒,無臨床或胚胎實驗室治療方案變動。研究期間本中心的胚胎著床率和臨床妊娠率均維持在穩(wěn)定水平。 為研究注射hCG日及注射hCG次日血清孕酮濃度與胚胎著床率之間的關(guān)系,全部1457個IVF新鮮胚胎移植周期納入進一步研究。 以胚胎著床率為因變量,通過多因素逐步回歸分析的方法,分析下列因素：年齡,獲卵數(shù),注射hCG日子宮內(nèi)膜厚度,注射hCG日雌二醇水平,注射hCG日孕酮水平,注射hCG次日雌二醇水平,注射hCG次日孕酮水平,注射hCG日孕酮與注射hCG次日孕酮之和,總rFSH用量,總rFSH刺激天數(shù),移植胚胎數(shù),移植優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù),與胚胎著床率之間的關(guān)系。 根據(jù)2011年-2013年間本中心的5828個IVF刺激周期注射hCG日及注射hCG次日血清孕酮濃度數(shù)據(jù),將孕酮濃度“升高”定義為孕酮值高于整體孕酮值分布的90%百分位數(shù),未能達到此標準則定義為孕酮濃度“正常”。 進一步將這1457個新鮮胚胎移植周期根據(jù)注射hCG日及注射hCG次日血清孕酮濃度正�；蛏叻譃�4組：NN組,注射hCG日及注射hCG次日孕酮濃度均正常；NH組,注射hCG日孕酮濃度正常但注射hCG次日孕酮濃度升高；HN組,注射hCG日孕酮濃度升高但注射hCG次日孕酮濃度正常；HH組,注射hCG日及注射hCG次日孕酮濃度均升高,進行臨床各指標及胚胎著床率和臨床妊娠率的組間比較。 結(jié)果： 1.根據(jù)5828個IVF刺激周期注射hCG日及注射hCG次日血清孕酮濃度數(shù)據(jù),注射hCG日孕酮平均水平為1.4±0.8ng/ml,注射hCG次日孕酮水平顯著增加7.9±5.5ng/ml(P0.001)。 2.注射hCG后12小時,血清孕酮濃度較注射hCG之前的孕酮濃度相比,上升5倍。 3.根據(jù)5828個IVF刺激周期注射hCG日及注射hCG次日血清孕酮濃度數(shù)據(jù),注射hCG日孕酮正常或升高的cut-off值為1.7ng/ml；注射hCG次日孕酮正常或升高的cut-off值為9.5ng/ml。 4.多因素逐步回歸分析結(jié)果顯示,年齡、獲卵數(shù)、注射hCG日孕酮和注射hCG次日孕酮之和為3個顯著影響胚胎著床率的因素。若將注射hCG日孕酮和注射hCG次日孕酮之和從自變量列表中剔除,則注射hCG次日孕酮被回歸方程選擇為第三個顯著影響胚胎著床率的因素；若進一步將注射hCG次日孕酮也從自變量列表中剔除,則注射hCG日孕酮被回歸方程選擇為第三個顯著影響胚胎著床率的因素。 5.1457個新鮮胚胎移植周期根據(jù)注射hCG日及注射hCG次日血清孕酮濃度正�；蛏叻譃�4組后比較發(fā)現(xiàn)：與NN組相比,HH組患者顯著更年輕(31.9±4.6歲29.7±3.5歲,P0.001),基礎FSH更低(8.1±1.9IU/L7.9±1.2IU/L,P0.05),獲卵數(shù)更多(7.9±4.0個12.7±3.3個,P0.001),胚胎數(shù)更多(5.3±3.0個6.7±2.6個,P0.001),移植胚胎數(shù)/移植周期無顯著差別(1.8±0.4個1.8±0.4個),移植優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)/移植周期差別無統(tǒng)計學意義(1.6±0.5個1.7±0.5個),但胚胎著床率卻顯著低下(36.0%22.2%,P0.001,),臨床妊娠率也顯著低下(59.7%37.5%,P0.001)。 結(jié)論： 臨床工作中決定是否進行全部胚胎冷凍時,不應僅關(guān)注注射hCG日血清孕酮濃度,還應結(jié)合考慮注射hCG次日的血清孕酮濃度。 第二部分IVF刺激周期中注射hCG日及注射hCG次日血清孕酮濃度對著床期內(nèi)膜形態(tài)學和uNK細胞數(shù)目的影響 目的： IVF刺激周期中注射hCG日及注射hCG次日的高血清孕酮濃度,是否影響著床期子宮內(nèi)膜的形態(tài)變化?以及uNK細胞的數(shù)目?方法： 本研究為單中心,前瞻性隊列研究。研究對象選自2013年7月～2013年12月間于浙江大學醫(yī)學院附屬邵逸夫醫(yī)院生殖中心接受IVF治療的119名患者。 研究期間,本中心的鮮胚移植策略：僅患者獲卵數(shù)"f15枚,注射hCG日孕酮"f2.0ng/ml,且無卵巢過度刺激(ovarian hyperstimulation syndrome, OHSS)傾向等條件均同時滿足的前提下,方可進行新鮮胚胎移植。否則,建議患者考慮全部新鮮胚胎冷凍,擇期行凍融胚胎移植。119名患者均按照本中心已建立的新鮮胚胎移植策略選擇進行全部胚胎冷凍。取卵術(shù)后按本中心常規(guī)黃體支持方案給予肌注黃體酮,于注射hCG+7天通過一次性宮腔組織吸引管取少量內(nèi)膜組織行形態(tài)學分析和uNK細胞數(shù)目檢測。 內(nèi)膜組織學評分由兩位有經(jīng)驗的觀察者依據(jù)Noyes等(1950)建立的標準按照盲法獨立完成；uNK細胞計數(shù)由兩位觀察者獨立完成。均進行觀察者間差異評估。 119名患者均于注射hCG日及注射hCG次日的清晨采取血樣檢測血清雌二醇濃度和孕酮濃度。 分別通過多因素逐步回歸的方法分析下列因素：注射hCG日孕酮濃度,注射hCG次日孕酮濃度,注射hCG日雌二醇濃度,注射hCG次日雌二醇濃度,rFSH刺激時間,與內(nèi)膜組織學評分結(jié)果和uNK細胞數(shù)目的關(guān)系。 根據(jù)2011年-2013年間本中心的5828個IVF刺激周期注射hCG日及注射hCG次日血清孕酮濃度數(shù)據(jù),將孕酮濃度“升高”定義為孕酮值高于整體孕酮值分布的90%百分位數(shù),未能達到此標準則定義為孕酮濃度“正�！�。由此,注射hCG日孕酮正常或升高的cut-off值為1.7ng/ml；注射hCG次日孕酮正�；蛏叩腸ut-off值為9.5ng/ml。進一步進行了內(nèi)膜組織學評分結(jié)果、腺體-基質(zhì)發(fā)育不同步比例和uNK細胞數(shù)目在孕酮正常組和孕酮升高組的組間比較。 結(jié)果： (注射hCG日和注射hCG次日血清高孕酮濃度與內(nèi)膜形態(tài)學變化之間的關(guān)系) 1.多因素逐步回歸分析結(jié)果顯示：注射hCG次日血清孕酮濃度為唯一顯著影響內(nèi)膜組織學評分結(jié)果的因素。 2.將119例樣本根據(jù)注射hCG次日血清孕酮濃度正�；蛏�(cut-off值：9.5ng/m1)分為兩組：觀察者1結(jié)果：與孕酮正常組(7.6±0.7天)相比,孕酮升高組的內(nèi)膜發(fā)育更為成熟(8.0±0.6天),差異顯著(P0.001,)；觀察者2結(jié)果：與孕酮正常組(6.8±1.0天)相比,孕酮升高組的內(nèi)膜發(fā)育更為成熟(7.6±0.8天),差異顯著(P0.001)。 3.兩位觀察者所提供的組織學評分結(jié)果具有很顯著的相關(guān)性(r=0.394,P0.001)。整體來講,70%的結(jié)果差異于1天之內(nèi),95%的結(jié)果差異于2天之內(nèi)。 4.孕酮正常組中腺體-基質(zhì)發(fā)育不同步(腺體-基質(zhì)成熟天數(shù)相差"g4天)的樣本比例約為～51%,顯著(P0.001)高于孕酮升高組中腺體-基質(zhì)發(fā)育不同步所占的樣本比例22%。(注射hCG日和注射hCG次日血清高孕酮濃度與內(nèi)膜uNK細胞數(shù)目之間的關(guān)系) 5.多因素逐步回歸分析結(jié)果顯示：注射hCG日血清孕酮濃度為唯一顯著影響內(nèi)膜uNK細胞數(shù)目的因素。 6.兩位觀察者uNK計數(shù)的結(jié)果顯著相關(guān)(r=0.9,P0.05),uNK細胞計數(shù)的平均差異值為2.4%(±3.3%)。 7.將119例樣本根據(jù)注射hCG日血清孕酮濃度正常或升高(cut-off值：1.7ng/m1)分為兩組：孕酮升高者內(nèi)膜的uNK細胞數(shù)目9.2%(1.3-21.6%)(中位數(shù)(范圍))顯著(P0.001)高于孕酮正常者的內(nèi)膜uNK細胞數(shù)目6.3%(1.4-18.7%)。 結(jié)論： IVF刺激周期中注射hCG日及注射hCG次日血清高孕酮促使著床期內(nèi)膜發(fā)育更為成熟,uNK細胞數(shù)目顯著增加。 第三部分IVF刺激周期中注射hCG日及注射hCG次日血清孕酮濃度對著床期內(nèi)膜基因表達譜的影響 目的： 研究IVF刺激周期中注射hCG日及注射hCG次日血清高孕酮對著床期內(nèi)膜基因表達譜的影響,本部分研究尤其關(guān)注的問題是,參與uNK細胞生成及功能調(diào)節(jié)的相關(guān)基因的表達,在多大程度上受到了高孕酮濃度的影響? 方法： 本研究為單中心,前瞻性隊列研究。研究對象選自2013年7月～2013年12月間于本生殖中心接受IVF治療的12名患者。 這12名患者均按照本中心已建立的鮮胚移植策略進行全部胚胎冷凍。取卵后按照本中心常規(guī)黃體支持方案肌注黃體酮,于注射hCG+7天通過一次性宮腔組織吸引管取少量內(nèi)膜組織行基因芯片實驗和組織形態(tài)學分析。 12名患者均于注射hCG日及注射hCG次日的清晨采取血樣檢測血清雌二醇濃度和孕酮濃度。根據(jù)2011年-2013年間本中心的5828個IVF刺激周期注射hCG日及注射hCG次日血清孕酮濃度數(shù)據(jù),將孕酮濃度“升高”定義為孕酮值高于整體孕酮值分布的90%百分位數(shù),未能達到此標準則定義為孕酮濃度“正常”。由此,注射hCG日孕酮正�；蛏叩腸ut-off值為1.7ng/ml；注射hCG次日孕酮正�；蛏叩腸ut-off值為9.5ng/ml。 根據(jù)注射hCG日孕酮濃度和注射hCG次日孕酮濃度正�；蛏�,12名患者可分為4組：組1(NN),注射hCG日和注射hCG次日孕酮均正常；組2(NH),注射hCG日孕酮正常但注射hCG次日孕酮升高；組3(HN),注射hCG日孕酮升高但注射hCG次日孕酮正常；組4(HH),注射hCG日和注射hCG次日孕酮均升高。 組間比較表達差異"g2倍,且P0.05被選擇為顯著差異表達基因。 分別依次進行組間顯著差異表達基因的比較：組4(HH)與組1(NN)比較,組3(HN)與組1(NN)比較,以及組2(NH)與組1(NN)比較。分別將各組間比較所獲得的顯著差異表達基因列表向DAVID(基因功能分析網(wǎng)站)提交,通過DAVID提供的KEGG pathway功能進行差異表達基因的相關(guān)功能分析。 根據(jù)組4(HH)與組1(NN)比較獲得的153個顯著差異表達基因,對12個樣本進行聚類分析。 選擇8個基因進行qRT-PCT驗證。這8個基因中,4個基因選自NK細胞介導細胞毒作用通路中表達異常的基因,包括CD247分子(Cd247),殺傷細胞瘦素樣受體超家族C,成員2(KLRC2),殺傷細胞瘦素樣受體超家族D,成員1(KLRD1),自然細胞毒作用觸發(fā)受體1(NCR1),另4個基因包括：水通道蛋白-3(AQP3),富含亮氨酸重復因子1(LRRC1),基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP26),和鈣結(jié)合蛋白S100P。 結(jié)果： 1.4組患者年齡、基礎內(nèi)分泌、注射hCG日雌二醇水平、注射hCG次日雌二醇水平、rFSH刺激時間、獲卵數(shù)等各臨床指標差異均無統(tǒng)計學意義。 2.組4(HH)與組1(NN)比較共153個基因表達差異顯著,DAVID KEGG pathway分析結(jié)果顯示4條pathway受到顯著影響,按照受影響程度從大到小依次排序為：NK細胞介導的細胞毒作用(15個基因表達失調(diào)),抗原表達和提呈(6個基因表達失調(diào)),移植物宿主相關(guān)疾病(6個基因表達失調(diào)),和淀粉和糖代謝(6個基因表達失調(diào))。 3.組3(HN)與組1(NN)的pathway分析結(jié)果顯示3條pathway受到顯著影響,按照受影響程度從大到小依次排序為：細胞周期(8個基因表達失調(diào)),剪接體(7個基因表達失調(diào)),NK細胞介導的細胞毒作用(7個基因表達失調(diào))。 4.組2(NH)與組1(NN)的pathway分析結(jié)果顯示5條pathway受到顯著影響,根據(jù)受影響程度從大到小依次為：細胞周期(7個基因表達失調(diào)),剪接體(7個基因表達失調(diào)),NK細胞介導的細胞毒作用(7個基因表達失調(diào)),wnt信號轉(zhuǎn)導通路(7個基因表達失調(diào)),和抗原表達和提呈(5個基因表達失調(diào))。 5.注射hCG日和注射hCG次日兩天內(nèi),只要有一天的孕酮濃度升高,NK細胞介導的細胞毒作用通路均受到顯著影響；若兩天的孕酮濃度均升高,NK細胞介導的細胞毒作用通路成為受影響最為顯著的一條pathway(P0.0001)。 6.組4(HHH)與組1(NN)比較時,15個NK細胞介導的細胞毒作用pathway中表達差異顯著的基因分別為：殺傷細胞瘦素樣受體超家族C,成員2(KLRC2,上調(diào)3.2倍)；殺傷細胞瘦素樣受體超家族C,成員3(Klrc3,上調(diào)2.2倍)；殺傷細胞瘦素樣受體超家族D,成員1(KLRD1,上調(diào)3.4倍)；殺傷細胞瘦素樣受體超家族K,成員1(KLRKl,上調(diào)2.4倍)；自然細胞毒觸發(fā)受體1(Ncrl,上調(diào)3.1倍)；顆粒酶B (GZMB,上調(diào)2.4倍)；血細胞生成信號轉(zhuǎn)導因子(HCST,上調(diào)2.5倍)；Fc fragment of IgG,低親合力Ⅲa,受體(CD16a)(Fcgr3a,上調(diào)2.3倍)；CD247分子(Cd247,上調(diào)2.3倍)；Fc fragment of IgE,高親合力I, gamma多肽受體FCER1G,上調(diào)2.8倍)；TYRO酪氨酸激酶結(jié)合蛋白(TYROBP,上調(diào)2.6倍)；穿孔素1(Prf1,上調(diào)2.4倍)；ras-相關(guān)C3肉毒桿菌毒素底物2(rho家族,小GTP結(jié)合蛋白Rac2)(rac2,上調(diào)2.3倍)；殺傷細胞瘦素樣受體超家族C,成員1(Klrcl,上調(diào)3.2倍)；腫瘤壞死因子(配體)超家族,成員10(TNFSF10,下調(diào)2.4倍)。 7.根據(jù)組4(HH)與組1(NN)比較得到的153個差異表達基因,對12個樣本的聚類結(jié)果顯示,4組患者的基因表達譜各不相同,其中,組2(NH)和組3(HN)的基因表達譜相對較為相似。 8. CD247, KLRC2, KLRD1, NCR1, AQP3, LRRC1, MMP26, S100P的qPT-PCR驗證結(jié)果均與芯片結(jié)果一致。結(jié)論：1.注射hCG日孕酮濃度和注射hCG次日孕酮濃度均可影響著床期內(nèi)膜基因表達譜的改變。 2.IVF刺激周期注射hCG日及注射hCG次日高孕酮對著床期子宮內(nèi)膜的影響可能是通過其對uNK細胞的作用來實現(xiàn)。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R714.8

【共引文獻】

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本文編號：1885978