本文選題：胎盤 + 蛋白質(zhì)組�。� 參考：《中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)》2014年博士論文

【摘要】：胎盤是母體與胎兒之間的重要器官,具有物質(zhì)交換、新陳代謝及屏障作用等重要生物功能,胎盤功能異常會(huì)導(dǎo)致先兆子癇等妊娠疾病的產(chǎn)生。許多與胎盤功能有關(guān)的生理生化過程都是由胎盤中構(gòu)成復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)的各種蛋白相互協(xié)調(diào)完成。因此,深入研究胎盤相關(guān)蛋白、蛋白間相互作用以及蛋白在不同生理病理?xiàng)l件下的差異表達(dá)以及翻譯后修飾研究,有助于進(jìn)一步了解胎盤的結(jié)構(gòu)與功能,尋找疾病標(biāo)志物、藥物靶標(biāo),疾病的早期診斷、治療、預(yù)后判斷、早期預(yù)防等方面具有重要臨床意義。 本研究通過BN/SDS-PAGE結(jié)合LC-MS/MS研究胎盤蛋白及蛋白質(zhì)復(fù)合物,共鑒定了733個(gè)非冗余蛋白以及34個(gè)蛋白復(fù)合物,其中1個(gè)為新的未發(fā)現(xiàn)有相互作用的復(fù)合物。通過生物信息學(xué)分析以及結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道的數(shù)據(jù),發(fā)現(xiàn)這些已知的復(fù)合物主要是線粒體呼吸鏈復(fù)合物、整合素復(fù)合物、蛋白酶體復(fù)合物以及熱休克蛋白復(fù)合物等。發(fā)現(xiàn)的新復(fù)合物為clathrin和small conductance calcium-activated potassium (SK) channel protein2。這兩個(gè)蛋白的相互作用進(jìn)一步通過antibody based gel shift assay、免疫共沉淀以及免疫熒光進(jìn)行了驗(yàn)證。這些結(jié)果表明BN/SDS-PAGE結(jié)合LC-MS/MS是一種很好的分析胎盤蛋白質(zhì)復(fù)合物的方法。 胎盤蛋白的磷酸化是目前胎盤蛋白質(zhì)組學(xué)研究熱點(diǎn)之一。從復(fù)雜樣本中有效富集磷酸化蛋白以及磷酸化肽段是具有挑戰(zhàn)性的工作。本研究合成了一系列形態(tài)可控、成分可調(diào)的鈦摻雜介孔硅材料來有效的富集磷酸化肽段以及磷酸化蛋白。通過改變前體中鈦/硅摩爾比來調(diào)節(jié)鈦摻雜介孔硅材料的表面積、直徑以及形狀等,利用這一系列的材料來富集酶解后的標(biāo)準(zhǔn)磷酸化蛋白。研究結(jié)果表明,當(dāng)鈦/硅摩爾比為8：1時(shí),該材料富集磷酸化肽段的效果最好,β-酪蛋白的檢測(cè)極限能達(dá)到1Ofmol, a-酪蛋白有15個(gè)磷酸化肽段被檢測(cè)到,優(yōu)于商業(yè)化的二氧化鈦珠子。我們將該材料用于胎盤線粒體磷酸化蛋白的富集,共鑒定了396個(gè)磷酸化肽段以及298個(gè)磷酸化蛋白,結(jié)果表明該材料能用于復(fù)雜樣本的磷酸化肽段富集。此外,本研究還提供了一種合成成分可調(diào)的磷酸化肽段富集材料的方法。 由于先兆子癇是一種與胎盤功能發(fā)生異常有關(guān)的重要妊娠疾病,本研究通過基于質(zhì)譜的二甲基標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法對(duì)正常孕婦以及先兆子癇孕婦胎盤蛋白質(zhì)組進(jìn)行了分析。鑒定出2636種蛋白,其中171種蛋白在先兆子癇胎盤中有差異表達(dá)。通過對(duì)差異蛋白生物信息學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)這些蛋白主要參與習(xí)慣性流產(chǎn)、顱內(nèi)HADHA高血壓、胎兒生長緩慢、胎兒死亡、妊娠期高血壓以及治病流產(chǎn)等信號(hào)通路。同時(shí)隨機(jī)挑選五種差異蛋白進(jìn)行免疫印跡以及免疫組化實(shí)驗(yàn),對(duì)這些蛋白的表達(dá)情況進(jìn)行驗(yàn)證,結(jié)果表明質(zhì)譜鑒定結(jié)果與免疫學(xué)結(jié)果一致。綜上所述,通過比較蛋白質(zhì)組分析正常妊娠和先兆子癇的胎盤,確定了一些可能參與胎盤病理變化的重要蛋白,對(duì)這些蛋白質(zhì)進(jìn)行進(jìn)一步的功能分析有助于了解先兆子癇胎盤以及與胎盤有關(guān)的疾病發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)型的關(guān)鍵生物學(xué)過程。 在上述研究基礎(chǔ)上,本論文對(duì)先兆子癇胎盤質(zhì)膜糖基化和磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)進(jìn)行了研究。通過二甲基標(biāo)記結(jié)合糖基化和磷酸化肽段的富集方法,研究了先兆子癇胎盤質(zhì)膜中的糖基化以及磷酸化蛋白表達(dá)譜,通過嚴(yán)格的數(shù)據(jù)篩選,共鑒定了1027條N-糖基化以及2094條磷酸化肽。7個(gè)糖基化肽段以及42個(gè)磷酸化肽段具有差異表達(dá)。這些差異蛋白進(jìn)行分析表明這些蛋白參與胎兒死亡以及原發(fā)性高血壓信號(hào)通路。通過分析正常以及先兆子癇妊娠的人胎盤質(zhì)膜蛋白質(zhì)組,我們構(gòu)建了胎盤蛋白質(zhì)相互作用圖譜、先兆子癇胎盤蛋白質(zhì)表達(dá)譜以及N-糖基化和磷酸化的蛋白質(zhì)表達(dá)譜,鑒定了在先兆子癇發(fā)生過程中的關(guān)鍵蛋白,建立了磷酸化蛋白富集的新方法,這些研究為深入了解先兆子癇胎盤和胎盤相關(guān)的疾病提供了基礎(chǔ)。
[Abstract]:placenta is an important organ between the maternal and the fetus , and has important biological functions such as substance exchange , metabolism and barrier function , and the placental function abnormality can lead to the generation of pregnancy diseases such as pre - eclampsia and the like .

This study identified 733 non - redundant proteins and 34 protein complexes by means of BN / SDS - PAGE combined with LC - MS / MS .

The phosphorylation of phosphorylated peptide and phosphorylating protein in placenta were studied . The results showed that when titanium / silicon molar ratio was 8 : 1 , the surface area , diameter and shape of Ti - doped mesoporous silica material were optimized .

Based on the analysis of differential protein bioinformatics , it was found that these proteins mainly involved in habitual abortion , intracranial HADHA hypertension , slow growth of fetus , fetal death , hypertension in pregnancy and abortion .

On the basis of the above research , this paper studied the glycosylation and phosphorylation Proteomics of the placental membrane of pre - eclampsia . The expression profiles of glycosylated and phosphorylated proteins were studied by means of the method of enrichment of dimethyl - labelled binding glycosylation and phosphorylating peptide . The protein expression profiles of the placenta proteins , the protein expression profiles of the placenta proteins and the protein expression profiles of N - glycosylation and phosphorylation were identified by means of rigorous data screening .

【學(xué)位授予單位】：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：O657.63;R714.244

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 ;Evaluation of strategy for analyzing mouse liver plasma membrane proteome[J];Science in China(Series C:Life Sciences);2007年06期

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本文編號(hào)：1824823