發(fā)布時(shí)間：2018-04-16 06:44

  本文選題：TBX2 + 卵巢癌�。� 參考：《天津醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:卵巢癌是目前致死率最高的婦科腫瘤,缺乏特異早期診斷手段和術(shù)后有效的藥物是主要原因。TBX2定位于染色體17q23,比較基因組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)卵巢癌在染色體17q23區(qū)域頻繁發(fā)生突變,TBX2是候選致癌基因之一。TBX2屬于T-box家族重要成員,廣泛參與胚胎發(fā)育和癌癥發(fā)生過程,是重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子。研究表明TBX2表達(dá)異常影響了包括乳腺癌、黑色素瘤等惡性腫瘤的細(xì)胞表型,本文計(jì)劃通過檢測(cè)不同卵巢組織中TBX2表達(dá)水平,觀察TBX2在卵巢癌細(xì)胞中表達(dá)定位,分析TBX2差異性表達(dá)對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖、衰老的影響,初步探討TBX2參與卵巢癌發(fā)生發(fā)展過程中可能的分子機(jī)制。方法:本課題分為三個(gè)部分開展研究。1.明確TBX2蛋白在卵巢癌細(xì)胞和組織中定位和表達(dá)水平:利用免疫熒光技術(shù)對(duì)卵巢癌中TBX2表達(dá)進(jìn)行定位,并采用免疫組織化學(xué)染色分析卵巢組織中TBX2表達(dá)水平。2.構(gòu)建TBX2恒定高表達(dá)和降表達(dá)卵巢癌SKOV3細(xì)胞株:構(gòu)建過表達(dá)TBX2和TBX2表達(dá)沉默的重組慢病毒載體質(zhì)粒,然后將上述質(zhì)粒和空載體質(zhì)粒分別包裝成慢病毒顆粒,再將攜帶不同基因表達(dá)的慢病毒分別感染卵巢癌SKOV3細(xì)胞,加藥篩選獲得TBX2恒定高表達(dá)和降表達(dá)卵巢癌細(xì)胞株,最后采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real Time PCR)和免疫印跡(Western blot)技術(shù)檢測(cè)各細(xì)胞株中TBX2 mRNA和蛋白表達(dá)水平。3.研究TBX2差異性表達(dá)對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖、衰老的影響,并初步分析相關(guān)分子機(jī)制:首先分別利用CCK8(cell counting kit-8)細(xì)胞計(jì)數(shù)法和克隆形成實(shí)驗(yàn)分析TBX2表達(dá)變化對(duì)人卵巢癌SKOV3細(xì)胞克隆形成能力和細(xì)胞增殖的影響。隨后采用細(xì)胞衰老相關(guān)的β-半乳糖苷酶染色法(SA-β-Gal)分析TBX2表達(dá)變化對(duì)細(xì)胞衰老影響,再利用實(shí)時(shí)定量PCR(Real Time PCR)和免疫印跡(Western blot)技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞衰老相關(guān)分子標(biāo)記物mRNA和蛋白表達(dá)變化。結(jié)果:1.TBX2在卵巢癌細(xì)胞高表達(dá),以細(xì)胞核分布為主,細(xì)胞質(zhì)中有少量表達(dá)。TBX2在卵巢癌組織中表達(dá)水平也明顯高于良性卵巢囊腫組織。2.成功構(gòu)建了過表達(dá)TBX2質(zhì)粒和TBX2基因沉默的慢病毒載體質(zhì)粒,通過慢病毒感染和藥物篩選,獲得穩(wěn)定的TBX2過表達(dá)和TBX2基因沉默的卵巢癌SKOV3細(xì)胞株。3.TBX2基因沉默后卵巢癌SKOV3細(xì)胞增殖減慢和克隆形成能力降低,而過表達(dá)TBX2的SKOV3細(xì)胞表現(xiàn)出促進(jìn)細(xì)胞增殖的能力,與對(duì)照組相比,均具有顯著性差異(P0.05)。SA-β-Gal結(jié)果顯示TBX2基因沉默引起衰老相關(guān)的β-半乳糖苷酶活性增強(qiáng),β-半乳糖苷酶染色陽(yáng)性率顯著增加,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),TBX2基因沉默誘導(dǎo)細(xì)胞衰老相關(guān)的分子標(biāo)記物P21WAF1和P16INK4A表達(dá)上調(diào)。結(jié)論:1.TBX2主要分布在卵巢癌細(xì)胞核中,可能與TBX2主要在細(xì)胞核中發(fā)揮調(diào)控功能相適應(yīng)。2.TBX2在卵巢癌組織中表達(dá)異常,提示TBX2可能參與卵巢惡性轉(zhuǎn)變過程。3.TBX2差異性表達(dá)對(duì)卵巢癌細(xì)胞表型產(chǎn)生重要影響,TBX2在卵巢癌SKOV3細(xì)胞中發(fā)揮促進(jìn)細(xì)胞增殖和抑制細(xì)胞衰老的功能,正向調(diào)控卵巢癌的發(fā)生發(fā)展。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R737.31

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7 趙U，

本文編號(hào)：1757718