本文選題：動物模型 + 凋亡　； 參考：《南京醫(yī)科大學》2014年碩士論文

【摘要】：目的：利用全反式維甲酸建立馬蹄內翻足胎鼠模型,研究畸形胎鼠的腿部組織及孕鼠胎盤組織中凋亡相關基因的表達情況。方法：將SD孕鼠按照隨機數(shù)表法分為實驗組與對照組,在孕鼠懷孕第10天,將12Omg/kg的全反式維甲酸溶于石蠟油中經(jīng)灌胃方式給予實驗組中的孕鼠,同時對照組中給予相同體積石蠟油灌胃。于孕鼠懷孕第20天在麻醉及無菌的條件下,將胎鼠經(jīng)剖腹的方式取出,取胎鼠腿部組織并剝離取下胎盤。利用熒光定量PCR和Western Blot技術,分別檢測胎鼠腿部組織中Bcl-2和BAX基因在mRNA水平及蛋白水平的表達情況,并應用Caspase-3試劑盒檢測Caspase-3的相對活性。將新鮮胎盤組織制備成單細胞懸液,利用流式細胞技術檢測其早期凋亡及晚期凋亡的情況；利用熒光定量PCR和Western Blot技術,分別檢測胎盤組織中BCL-2和BAX基因在mRNA水平及蛋白水平的表達情況；包埋胎盤組織制備石蠟切片,利用免疫組化技術檢測BCL-2和BAX的表達情況；應用Caspase-3試劑盒檢測Caspase-3的相對活性。結果：在實驗組中觀察到胎鼠馬蹄內翻足畸形,有的單足畸形,有的雙足畸形,以及小顱、短尾、無尾、脊柱裂等畸形,而對照中未發(fā)現(xiàn)畸形的胎鼠。Bcl-2基因在實驗組的胎鼠腿部組織中的mRNA水平和蛋白水平呈低表達(P0.05),而BAX基因的mRNA水平和蛋白水平呈高表達(P0.05)。實驗組胎鼠腿部組織中的CASPASE-3相對活性較對照組相比增高(P0.05)。通過流式細胞檢測到實驗組胎盤組織中有促凋亡的發(fā)生。Bcl-2基因在實驗組孕鼠胎盤中的raRNA水平和蛋白水平呈低表達(P0.05)且切片中染色較淺,而BAX基因在實驗組中的mRNA水平和蛋白水平呈高表達(P0.05)且切片中染色較深。實驗組中CASPASE-3相對活性較對照組相比增高(P0.05)。結論：畸形胎鼠腿部組織中凋亡相關基因Bcl-2、BAX和Caspase-3的表達異�？赡芘c馬蹄內翻足的發(fā)生有關。提示了先天性馬蹄內翻足可能與神經(jīng)肌肉等的異常凋亡有關。因此,對進一步研究CTEV的致病基因與發(fā)病機制提供了可能的研究方向�；翁ナ笤惺筇ケP組織中促凋亡的發(fā)生可能與馬蹄內翻足的發(fā)生有關。揭示了子宮胎盤因素對馬蹄內翻足發(fā)生的影響,對產(chǎn)前診斷為馬蹄內翻足的胎兒進行早期干預治療提供實驗依據(jù),為臨床開展可能的針對性治療及治療方法的選擇提供參考依據(jù)。
[Abstract]:Aim: to study the expression of apoptosis-related genes in the leg tissues and placental tissues of malformed fetal rats by using all-trans retinoic acid (ATRA) to establish a rat model of horseshoe varicose foetus.Methods: the SD pregnant rats were divided into experimental group and control group according to the random number table method. On the 10th day of gestation, all trans retinoic acid (ATRA) of 12Omg/kg was given to pregnant rats of experimental group by gavage in paraffin oil.At the same time, the control group was given the same volume of paraffin oil.On the 20th day of pregnancy, the fetal mice were removed by laparotomy under anaesthesia and aseptic conditions, and the leg tissue was removed and placenta was removed.Fluorescence quantitative PCR and Western Blot techniques were used to detect the expression of Bcl-2 and BAX genes in fetal rat leg tissues at mRNA level and protein level, respectively. Caspase-3 kit was used to detect the relative activity of Caspase-3.Single cell suspension was prepared from fresh placenta tissue, and its early and late apoptosis was detected by flow cytometry, and fluorescence quantitative PCR and Western Blot techniques were used.The expression of BCL-2 and BAX genes in placenta tissue was detected at mRNA level and protein level respectively. Paraffin sections were prepared from placenta and the expression of BCL-2 and BAX were detected by immunohistochemistry. The relative activity of Caspase-3 was detected by Caspase-3 kit.Results: in the experimental group, the fetal rat horseshoe varus foot deformity was observed, including one foot deformity, some bipedal deformity, small cranium, short tail, no tail, spina bifida and so on.However, no abnormal fetal mouse. Bcl-2 gene was found in the experimental group. The expression of mRNA and protein was low in the leg tissue of the experimental group, while the mRNA level and protein level of the BAX gene were highly expressed in the leg tissue of the experimental group.The relative activity of CASPASE-3 in the leg tissue of the experimental group was higher than that of the control group (P 0.05).The expression of raRNA and protein in placenta of experimental group was low (P0.05), and the staining of Bcl-2 gene was light in sections of placenta of experimental group, and the expression of Bcl-2 gene in placenta of experimental group was low (P0.05), and the expression of Bcl-2 gene in placenta of experimental group was low.BAX gene was highly expressed in the mRNA and protein levels of the experimental group (P0.05) and stained deeply in the sections.The relative activity of CASPASE-3 in the experimental group was higher than that in the control group (P 0.05).Conclusion: the abnormal expression of apoptosis-related genes Bcl- 2, Bax and Caspase-3 may be related to the development of horseshoe varus pedis.The results suggest that congenital equinovarus foot may be related to abnormal apoptosis of nerve and muscle.Therefore, it provides a possible research direction for the further study of the pathogenetic genes and pathogenesis of CTEV.Apoptosis in placenta of pregnant rats with malformation may be related to the development of equinovarus.The effects of uterine and placental factors on the occurrence of equinovarus were revealed, and the experimental basis was provided for the early intervention treatment of the fetus diagnosed as horseshoe varus before birth.To provide a reference for the clinical development of possible targeted treatment and the choice of treatment methods.
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R714.5

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