本文選題：宮頸癌　切入點：progranulin　出處：《山東大學》2017年碩士論文

【摘要】：宮頸癌是女性最常見的惡性腫瘤之一,盡管已有人乳頭瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)疫苗等預(yù)防措施,但仍然嚴重威脅著女性健康,且發(fā)病年齡呈年輕化趨勢,在14～44歲女性中的致死率僅次于乳腺癌。宮頸癌的致病因素有多種,其中高危型的HPV病毒感染是導(dǎo)致宮頸癌形成的主要因素。HPV的病毒癌基因E6及E7影響到細胞內(nèi)周期蛋白的表達及功能,比如:E6基因的表達產(chǎn)物能夠降解抑癌蛋白p53從而抑制其作用的發(fā)揮;E7基因能夠降解抑癌蛋白pRb,導(dǎo)致宮頸癌的發(fā)生。雖然近年已有針對HPV病毒疫苗,但疫苗具有一定的局限性,僅針對于少數(shù)特定的HPV病毒型,并且對于宮頸癌患者及HPV攜帶者沒有有效的作用。臨床治療宮頸癌的主要手段仍然依賴于傳統(tǒng)的手術(shù)、放射治療與藥物化療。其中化療通常作為宮頸癌治療的常用輔助手段,配合手術(shù)治療、放療。鉑類藥物是常用的化療藥物,如順鉑,卡鉑,奧沙利鉑等。順鉑是典型的鉑類藥物之一,在結(jié)構(gòu)上,它由一個二價鉑與兩個氯原子及兩個氨分子構(gòu)成,分子質(zhì)量為301.1。順鉑進入細胞后經(jīng)歷一系列水合作用,一個或兩個氯原子被水分子取代,成為有活性的形式�；罨捻樸K是一類具有高度活性的分子,可以結(jié)合DNA、RNA、蛋白質(zhì)和膜磷脂等,其中順鉑與DNA形成鏈內(nèi)及鏈間的加合物,從而阻斷DNA的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄過程,使細胞周期阻斷從而導(dǎo)致細胞死亡,是順鉑介導(dǎo)細胞毒性的主要機制。盡管化療是癌癥患者主要的治療手段,然而在化療過程中,癌細胞可通過獲得性或固有性方式產(chǎn)生針對各種抗腫瘤藥物的耐藥性,即多藥耐藥。多藥耐藥往往導(dǎo)致化療失敗,是導(dǎo)致腫瘤患者復(fù)發(fā)和死亡的突出臨床問題。多藥耐藥的具體機制十分復(fù)雜,其中最重要的機制是可利用三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)為能量驅(qū)動多種抗癌藥物外排的ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運蛋白(ATP-binding cassette(ABC)transporters)高表達。多藥耐藥蛋白(MRP)亞家族是ABC轉(zhuǎn)運體超家族的C組,又稱ABCC,其中MRP2、MRP5及MRP6與細胞的鉑類藥物耐藥有關(guān)。PGRN(progranulin,前體顆粒蛋白),是由7.5個串聯(lián)重復(fù)的富含半胱氨酸的GRN基序組成,參與多種生物學功能�，F(xiàn)已證實PGRN與炎癥反應(yīng)、損傷修復(fù)、軟骨發(fā)育、早期胚胎發(fā)育、神經(jīng)退行性疾病及腫瘤形成有關(guān)。有研究報道PGRN能夠保護細胞抵抗順鉑導(dǎo)致的細胞死亡,但未對具體的機制做深入的研究,且僅在肝癌細胞系誘導(dǎo)的順鉑耐受細胞株中進行了實驗。前期研究發(fā)現(xiàn)PGRN在宮頸癌組織中高表達,PGRN能夠促進宮頸癌細胞惡性轉(zhuǎn)化與增殖。然而,PGRN在宮頸癌化療藥物應(yīng)答中的作用及PGRN促進順鉑化療耐受的分子機制還有待深入研究。目的:本論文旨在表征PGRN在順鉑處理的宮頸癌細胞中的表達變化;明確PGRN在順鉑化療耐受中的功能,探索PGRN促進化療耐受的機制及關(guān)鍵的調(diào)控通路。方法:利用順鉑處理宮頸癌細胞系(HeLa、SiHa及CaSki)檢測PGRN的mRNA和蛋白質(zhì)水平表達變化;通過加入重組PGRN或抑制細胞內(nèi)PGRN表達,使用CCK8、流式細胞術(shù)等方法檢測順鉑處理的宮頸癌細胞細胞活力、細胞死亡與凋亡、DNA損傷等的影響;利用ICP-MS技術(shù)檢測宮頸癌細胞內(nèi)外鉑元素的含量;使用實時熒光定量PCR、免疫印跡法分析PGRN處理的宮頸癌細胞中多藥耐藥相關(guān)蛋白MRP2和轉(zhuǎn)錄因子NRF2的表達變化。結(jié)果:順鉑能夠劑量和時間依賴性地促進宮頸癌細胞系中PGRN的表達,PGRN能夠緩解順鉑對細胞造成的細胞活力阻滯,抵抗順鉑造成的細胞死亡及DNA損傷,PGRN能夠增強細胞對順鉑的外排作用,減少細胞內(nèi)的藥物積累;PGRN能夠通過NRF2提高細胞內(nèi)多藥耐藥蛋白MRP2的表達水平,參與PGRN介導(dǎo)的順鉑外排及順鉑耐受。結(jié)論:本論文首次發(fā)現(xiàn)PGRN能夠抵抗順鉑誘導(dǎo)的宮頸癌細胞死亡,促進癌細胞的生存發(fā)展;首次證實了 PGRN能夠通過轉(zhuǎn)錄因子NRF2促進MRP2轉(zhuǎn)錄表達,降低宮頸癌細胞內(nèi)順鉑藥物的積累增加藥物的外排,介導(dǎo)順鉑耐受。這些研究進一步完善了 PGRN對宮頸癌細胞發(fā)生發(fā)展的機理,拓展了 PGRN的功能,為臨床提高宮頸癌治療效率提供了新的潛在靶點。
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【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R737.33

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