本文選題：環(huán)磷酸鳥苷　切入點：活性氧　出處：《蘭州大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：目的：(1)探討活性氧(ROS)對精子活力、精子細(xì)胞死亡率、核DNA完整及頂體反應(yīng)的影響；(2)探討環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)對ROS誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激對精子損傷的改善作用及其作用機理。 方法：經(jīng)Percoll梯度離心法制作精子懸液,應(yīng)用計算機輔助分析系統(tǒng)(CASA)進(jìn)行精子活力分析；應(yīng)用伊紅-Y染色法觀察ROS對精子死亡率的影響；應(yīng)用流式細(xì)胞儀(FACS)及ROS敏感的新型熒光探針H2DCF-DA檢測精子細(xì)胞內(nèi)活性氧的產(chǎn)生情況；應(yīng)用RT-PCR檢測精子細(xì)胞內(nèi)抗氧化物酶的表達(dá)；應(yīng)用AOT測定精子DNA的完整性；應(yīng)用FITC-PSA熒光染色法檢測精子頂體反應(yīng)。 結(jié)果：(1)100μM cGMP增加了精子的前向運動力；(2)200μM SNP對精子的前向運動力無影響,但與LY83583同時孵育精子時,可顯著地降低精子的前向運動力；(3)過氧化氫酶(CAT)和cGMP可顯著的逆轉(zhuǎn)SNP和LY83583對精子前向性運動的抑制作用；(4)SNP和LY83583同時處理的精子死亡率明顯上升,而且可生成大量的活性氧(ROS);(5) cGMP可以顯著地誘導(dǎo)CAT和錳-超氧化物歧化酶(Mn-SOD)的表達(dá),抑制了活性氧對精子細(xì)胞產(chǎn)生的氧化應(yīng)激損傷；(6)精子的前向運動力隨H202濃度的增加呈下降趨勢,cGMP可以改善H202對精子前向運動力的抑制作用；(7)H202組DFI明顯高于對照組,H2O2+cGMP組、H2O2+CAT組DFI均明顯低于H202組,cGMP和CAT可以顯著逆轉(zhuǎn)H202對DNA完整性的損傷；(8)cGMP組頂體反應(yīng)率明顯高于對照組、H202組；H202組、SNP組的AR%均高于對照組。 結(jié)論：(1)低濃度的NO、H2O2可以增加精子活力,高濃度時顯著降低精子活力。(2)cGMP在保護(hù)精子免受氧化脅迫損傷中可能發(fā)揮著重要作用,能夠降低ROS的產(chǎn)生、細(xì)胞死亡率和DNA完整性。(3)cGMP對抗氧化物酶的誘導(dǎo)表達(dá)可能參與了精子的氧化還原反應(yīng)的調(diào)控。(4)cGMP可以促進(jìn)精子頂體反應(yīng)的發(fā)生。(5)cGMP對體外精子具有獨特的生理作用,尤其對于ART的精子制備過程。
[Abstract]:Objective to investigate the effects of reactive oxygen species (Ros) on sperm motility, sperm cell mortality, nuclear DNA integrity and acrosome reaction. Methods: sperm suspension was prepared by Percoll gradient centrifugation, sperm motility was analyzed by computer aided analysis system (CASA), and the effect of ROS on sperm mortality was observed by eosin Y staining. The production of reactive oxygen species (Ros) in sperm cells was detected by flow cytometry (FACS) and a novel fluorescent probe (H2DCF-DA) sensitive to ROS. The expression of antioxidant enzymes in sperm cells was detected by RT-PCR. The integrity of DNA was determined by AOT. Sperm acrosome reaction was detected by FITC-PSA fluorescence staining. Results 100 渭 M cGMP increased the forward-motility of spermatozoa. 200 渭 M SNP had no effect on the forward motility of spermatozoa, but when incubated with LY83583, the sperm was incubated simultaneously. Catalase (catalase) and cGMP could significantly reverse the inhibitory effect of SNP and LY83583 on sperm anterior motility. The death rate of spermatozoa treated with SNP and LY83583 was significantly increased. Moreover, a large number of reactive oxygen species (Ros) 5) cGMP could significantly induce the expression of CAT and Mn-SOD. Inhibitory effect of Ros on oxidative stress injury induced by Ros) the forward motility of spermatozoa decreased with the increase of H202 concentration. CGMP could improve the inhibitory effect of Ros on sperm forward-motility. The DFI in the group of 7H202 was significantly higher than that in the control group. The DFI of H _ 2O _ 2 cGMP group was significantly lower than that of H _ 2O _ 2 CAT group and CAT group. The acrosome reaction rate in H _ 2O _ 2 cGMP group was significantly higher than that in H _ 2O _ 2 group and H _ 2O _ 2 group. Conclusion low concentration of H _ 2O _ 2 can increase sperm motility, and at high concentration, it may play an important role in protecting spermatozoa from oxidative stress, and can reduce the production of ROS, which may play an important role in protecting spermatozoa from oxidative stress. Cell death rate and the expression of antioxidant enzymes induced by DNA integrality may be involved in the regulation of redox reaction of spermatozoa. CGMP can promote the occurrence of acrosome reaction in spermatozoa. It has a unique physiological effect on spermatozoa in vitro. Especially for the sperm preparation process of ART.
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R711.6

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本文編號：1671702