本文關(guān)鍵詞： 原代培養(yǎng) 宮頸上皮細(xì)胞 中性蛋白酶 角質(zhì)細(xì)胞無血清培養(yǎng)基　出處：《鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)》2017年03期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的:探索一種高效、可重復(fù)的正常宮頸上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)方法。方法:取60例正常宮頸組織,分成2組,分別采用Ⅱ型中性蛋白酶聯(lián)合0.25 g/mL胰蛋白酶-EDTA(中性蛋白酶聯(lián)合法)及Ⅰ型膠原酶消化分離后進(jìn)行原代培養(yǎng),比較兩種分離效果;觀察采用中性蛋白酶聯(lián)合法消化不同時(shí)間對分離效果的影響。觀察添加體積分?jǐn)?shù)5%FBS dK-SFM培養(yǎng)基與單純dK-SFM培養(yǎng)基培養(yǎng)原代宮頸上皮細(xì)胞的生長曲線差異,并用形態(tài)學(xué)、廣譜角蛋白免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定細(xì)胞來源。結(jié)果:正常宮頸上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)總成功率為40%。中性蛋白酶聯(lián)合法成功率、分離所得細(xì)胞密度、原代細(xì)胞融合時(shí)間及細(xì)胞純度均高于Ⅰ型膠原酶消化法(P0.05)。中性蛋白酶消化20 h的分離效果優(yōu)于消化16和24 h(P0.05)。體積分?jǐn)?shù)5%FBS dK-SFM培養(yǎng)基原代培養(yǎng)的宮頸上皮細(xì)胞增殖活性高于單純dK-SFM培養(yǎng)基(P0.05)。細(xì)胞生長狀況良好,可在體外傳代至5~6代,并可凍存與復(fù)蘇,免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示廣譜角蛋白表達(dá)陽性。結(jié)論:Ⅱ型中性蛋白酶聯(lián)合0.25 g/mL胰蛋白酶-EDTA分離法和體積分?jǐn)?shù)5%FBS dK-SFM培養(yǎng)基培養(yǎng)原代正常宮頸上皮細(xì)胞,高效、可重復(fù)性好。
[Abstract]:Objective: to explore an efficient and repeatable primary culture method of normal cervical epithelial cells. Methods: 60 cases of normal cervical tissues were divided into two groups. Type 鈪，

本文編號(hào)：1553982