本文關鍵詞： 卵巢癌 順鉑耐藥 lincRNA H19　出處：《浙江大學》2016年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：卵巢癌是女性常見的惡性腫瘤之一,其死亡率居婦科惡性腫瘤之首�；熢l(fā)和繼發(fā)耐藥是導致卵巢癌患者存活率低的重要因素。順鉑和DNA可以形成鏈內和鏈間交聯(lián),從而引起DNA損傷。研究表明一些基因間長片段非編碼RNA(lincRNAs)廣泛參與了腫瘤細胞DNA損傷應答的各個環(huán)節(jié)。因此,lincRNAs可能參與了卵巢癌鉑類耐藥發(fā)生。然而,目前關于"lincRNAs如何參與卵巢癌順鉑耐藥的產生"的認識依舊有限。1)本論文通過順鉑間隔刺激法建立了卵巢癌順鉑耐藥細胞株。通過克隆形成率法分析,發(fā)現細胞株A2780-DR對順鉑、紫杉醇和雙氧水的抗性都明顯增強。通過轉錄組測序分析卵巢癌順鉑敏感和耐藥細胞株,結合生物信息學分析獲得了 436個差異表達的lincRNAs。經熒光定量 PCR驗證,linc-RECK-3,H19,LUCAT1,LINC00961 和 linc-CARS2-2等在耐藥細胞株中明顯增加,而linc-TNFRSF19-1和LINC00515在耐藥株中明顯降低。H19和LUACT1在癌組織中高表達,且H19高表達的卵巢癌患者容易復發(fā)。2)H19在敏感細胞株中能被順鉑誘導表達,而在耐藥細胞株中不能被誘導。耐藥細胞株中H19被干擾后,細胞內H19的表達量明顯下降,同時細胞對順鉑的敏感性也明顯增加。裸鼠實驗也證實了耐藥細胞中H19被干擾后增加了對順鉑的敏感性。3)采用非標記定量蛋白質組學分析尋找被H19調控并參與順鉑耐藥發(fā)生的蛋白。耐藥細胞株與敏感細胞株中差異表達蛋白有113個,其中有27個是NRF2靶蛋白。KEGG分析發(fā)現有6個NRF2靶蛋白參與還原型谷胱甘肽(GSH)代謝。Western-blot實驗發(fā)現有7個蛋白(ALDH1A1,NQO1,GSR,G6PD,GCLC,GCLM和NRF2)均在耐藥細胞中高表達。與耐藥細胞比較,敏感細胞(A2780和A2780-DR/H19si)對雙氧水更敏感,且細胞內GSH水平更低。耐藥細胞NRF2干擾或GSH合成酶抑制劑丁硫氨酸亞砜胺(BSO)處理后均增加了對順鉑的敏感性。本論文研究發(fā)現了一些與順鉑耐藥有潛在關系的lincRNAs,為后續(xù)深入研究這些lincRNAs參與順鉑耐藥分子機制提供基礎。論文首次提出H19通過NRF2通路調節(jié)GSH代謝促進順鉑耐藥,加深了我們對順鉑耐藥機制的理解。為腫瘤化療效果的提升提供了理論基礎。
[Abstract]:Ovarian cancer is one of the most common malignant tumors in women. Chemotherapeutic primary and secondary drug resistance is an important factor leading to low survival rate of ovarian cancer patients. Cisplatin and DNA can form intrachain and inter-chain crosslinking. It is shown that some noncoding RNAs (lincRNASs) are involved in the DNA damage response of tumor cells. LincRNAs may be involved in the development of platinum resistance in ovarian cancer. There is still limited understanding of how lincRNAs is involved in the production of cisplatin resistance in ovarian cancer. In this paper, cisplatin resistant ovarian cancer cell lines were established by cisplatin interval stimulation. It was found that the resistance of cell line A2780-DR to cisplatin, paclitaxel and hydrogen peroxide was significantly increased. 436 differentially expressed lincRNAs were obtained by bioinformatics analysis. Linc-RECK-3 H19 LUCAT1 was confirmed by fluorescence quantitative PCR. LINC00961 and linc-CARS2-2 were significantly increased in drug-resistant cell lines. However, linc-TNFRSF19-1 and LINC00515 significantly decreased the expression of. H19 and LUACT1 in cancer tissues. Moreover, high expression of H19 in ovarian cancer patients can be easily relapsed. 2H19 can be induced by cisplatin in sensitive cell line, but not in drug-resistant cell line. H19 in drug-resistant cell line is interfered with. The expression of H19 decreased significantly. At the same time, the sensitivity of cells to cisplatin was also significantly increased. The results of nude mice also confirmed that H19 in drug-resistant cells increased the sensitivity to cisplatin after being interfered with. 3). Unlabeled quantitative proteomic analysis was used to search for proteins regulated by H19 and involved in cisplatin resistance. There were 113 differentially expressed proteins in drug resistant and sensitive cell lines. Among them, 27 were NRF2 target proteins. KEGG analysis showed that 6 NRF2 target proteins were involved in GSH of reduced glutathione. The results of metabolism. Western-blot analysis showed that there were 7 ALDH1A1 proteins. NQO1GSRG6PDGCLM and NRF2) were highly expressed in drug-resistant cells, compared with those in drug-resistant cells. Sensitive cells such as A2780 and A2780-DRR / H19si) were more sensitive to hydrogen peroxide. NRF2 interference or GSH synthase inhibitor butyronine sulfoxide amines (BSOs) was also found in drug-resistant cells. After treatment, the sensitivity to cisplatin was increased. In this study, we found some lincRNAs which have potential relationship with cisplatin resistance. In order to provide a basis for further study of the molecular mechanism of cisplatin resistance, H19 was proposed to regulate the metabolism of GSH through the NRF2 pathway to promote cisplatin resistance. Our understanding of the mechanism of cisplatin resistance is deepened, which provides a theoretical basis for the improvement of chemotherapy effect.
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.31

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