本文關(guān)鍵詞：懸浮馴化HEK-293FT細胞表達人乳頭瘤病毒16型假病毒及其冷凍電鏡結(jié)構(gòu)解析　出處：《病毒學(xué)報》2016年05期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：為了大量獲得人乳頭瘤病毒(HPV)16型的假病毒顆粒(PsV),將貼壁生長的293FT細胞馴化成為懸浮細胞系進行大規(guī)模的懸浮培養(yǎng),同時優(yōu)化假病毒純化方法,并使用冷凍電鏡解析其三維空間結(jié)構(gòu)。本研究通過逐步降低培養(yǎng)基中血清濃度和加入抗聚團劑等方法,獲得了可在Wave生物反應(yīng)器中大規(guī)模懸浮培養(yǎng)的293FT細胞,經(jīng)過攜有HPV16L1、L2基因和GFP報告基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染,實現(xiàn)了大規(guī)模制備HPV16假病毒;利用CsCl等密度和蔗糖密度梯度超速離心的方法,獲得高純度的HPV16假病毒顆粒,滴度為8.2×10~5 TCID50/!L;蛋白印跡結(jié)果顯示HPV16假病毒中含有L1和L2蛋白,定量ELISA測得L1蛋白的含量為156.0μg/mL;最后使用Tecnai G2F30冷凍電鏡和Falcon電子直接探測相機采集冷凍HPV16假病毒的圖像,應(yīng)用AUTO3DEM軟件解析其結(jié)構(gòu),結(jié)構(gòu)分辨率為14，

本文編號：1399577