本文關(guān)鍵詞：SDF-1在豬小腸黏膜下基質(zhì)代陰道中的表達(dá)研究

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【摘要】：目的:有研究表明,在損傷中,來(lái)自損傷器官的細(xì)胞高度表達(dá)基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1(Stromal cell-derived factor-1,SDF-1)并引起局部SDF-1水平的增高,這會(huì)導(dǎo)致CD34+表達(dá)的干/祖細(xì)胞通過(guò)SDF-1濃度梯度的趨化作用在損傷部位募集與停留,并參與到組織損傷修復(fù)中。本實(shí)驗(yàn)的主要研究目的為探討SDF-1在豬小腸黏膜下基質(zhì)代陰道中隨時(shí)間的變化規(guī)律,指導(dǎo)外源性干細(xì)胞移植的最佳時(shí)機(jī)。方法:選取體重在200g-250g雌性SD大鼠,手術(shù)切除正常陰道組織,將豬小腸黏膜下基質(zhì)(Small intestinal submucosa,SIS)植入切除陰道組織后形成的腔穴內(nèi),同時(shí)放入模具支撐,以防止閉鎖。SIS的頂端與宮頸外口相連,底端與陰道外口切緣縫合。在術(shù)后1天、3天、5天、7天、14天處死動(dòng)物,取出重建的陰道組織。檢測(cè)SDF-1在基因和蛋白水平上的表達(dá)變化:1提取各個(gè)時(shí)間點(diǎn)重建陰道組織和正常陰道組織的總RNA,各取4μl,分別與2μl溴酚藍(lán)混合,在1.5%的瓊脂糖凝膠中電泳,當(dāng)溴酚藍(lán)電泳出一段距離后,移至紫外線透視儀在波長(zhǎng)為300nm的光照射下進(jìn)行觀察,檢測(cè)RNA的完整性。RNA完整性檢測(cè)合格后再行RT-q PCR,檢測(cè)SDF-1的在基因水平的表達(dá)情況。2提取不同時(shí)間點(diǎn)重建陰道組織和正常陰道組織的蛋白質(zhì),通過(guò)Western blotting方法檢測(cè)各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的SDF-1在蛋白水平的表達(dá)變化。結(jié)果:1分別提取正常陰道組織、術(shù)后第1天、3天、5天、7天、14天的重建陰道組織總RNA后,RNA的電泳帶28s、18.5s、8s清晰,證實(shí)提取的RNA完整性良好。2反應(yīng)完成后將所有的總RNA用全波長(zhǎng)紫外/可見光掃描分光光度計(jì)進(jìn)行擴(kuò)增曲線分析,SDF-1和GAPDH的擴(kuò)增曲線指數(shù)增長(zhǎng)期基本平行,提示擴(kuò)增效率基本一致,結(jié)果以GAPDH作為內(nèi)參進(jìn)行相對(duì)定量分析,按公式X_0=2~(Ct GAPDH-Ct),計(jì)算目的基因的相對(duì)表達(dá)量,結(jié)果顯示在手術(shù)植入SIS支架后,SDF-1的表達(dá)呈上升趨勢(shì),SDF-1的表達(dá)量在術(shù)后第5天達(dá)到高峰,第7天開始下降。3 Western blotting檢測(cè)結(jié)果顯示手術(shù)切除大鼠陰道并植入SIS支架后第5天SDF-1的表達(dá)量達(dá)到峰值,術(shù)后第7天開始下降,進(jìn)一步驗(yàn)證了RT-q PCR的結(jié)果。結(jié)論:通過(guò)手術(shù)方法切除大鼠陰道并置入SIS后,損傷部位代陰道組織的SDF-1表達(dá)隨時(shí)間推移呈上升趨勢(shì),在術(shù)后第5天達(dá)到高峰,第7天SDF-1的表達(dá)量開始下降,推測(cè)SDF-1對(duì)干/祖細(xì)胞遷移的趨化作用在術(shù)后第5天最強(qiáng),研究結(jié)果為干細(xì)胞治療時(shí)移植外源性干細(xì)胞窗口期的選擇提供了依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R713

【參考文獻(xiàn)】

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