本文關(guān)鍵詞：異紫堇堿在宮頸癌SiHa細(xì)胞中通過逆上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化途徑實(shí)現(xiàn)抗癌作用

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【摘要】：背景與目的:宮頸癌是全世界導(dǎo)致婦女死亡的最主要惡性腫瘤之一,近年來發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì),發(fā)病年齡亦趨于年經(jīng)化。宮頸癌的治療目前仍以手術(shù)治療為主,輔以化學(xué)藥物治療和放射治療。但手術(shù)切除創(chuàng)傷較大,功能受損嚴(yán)重;放化療常常伴有嚴(yán)重的并發(fā)癥,且醫(yī)療費(fèi)用昂貴,療效不甚滿意。近年來研究發(fā)現(xiàn),HPV16亞型感染是激發(fā)宮頸上皮惡性轉(zhuǎn)化的最主要因素,但目前尚無抑制HPV基因表達(dá)和功能活性的有效方法,若能解決這一難題,將是宮頸癌防治工作的一大突破。異紫堇堿(Isocorydine,ICD)是在禿瘡花中發(fā)現(xiàn)的一種異喹啉類生物堿單體,可從植物中直接提取也可化學(xué)合成制得。已有研究發(fā)現(xiàn)異紫堇堿可以在體外抑制攜帶不同HPV亞型的人宮頸癌Hela和Si Ha細(xì)胞株中E6、E7基因的表達(dá),本文旨在研究異紫堇堿抑制HPV16E6表達(dá)的具體作用和機(jī)制,此研究的深入可能使異紫堇堿成為一種治療HPV感染和宮頸癌的新的有效中藥單體,或?yàn)橐云錇榛A(chǔ)設(shè)計(jì)一類新藥提供理論依據(jù)。方法:體外培養(yǎng)攜帶HPV16E6的Si Ha細(xì)胞,利用MTT實(shí)驗(yàn)初步檢測(cè)異紫堇堿對(duì)Si Ha細(xì)胞活性產(chǎn)生的影響,并通過流式細(xì)胞學(xué)方法檢測(cè)處理后的Si Ha細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的改變。采用全基因組基因芯片表達(dá)譜技術(shù)測(cè)定異紫堇堿處理后的Si Ha細(xì)胞株在轉(zhuǎn)錄基因水平上表達(dá)的改變,利用RT-PCR手段驗(yàn)證芯片結(jié)果后,通過Western-blot驗(yàn)證其在蛋白質(zhì)水平發(fā)生的改變。結(jié)果:異紫堇堿對(duì)宮頸癌Si Ha細(xì)胞增生具有明顯的抑制作用,MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示處理72h時(shí)最高抑制率可達(dá)68.69%。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果可發(fā)現(xiàn)異紫堇堿對(duì)Si Ha細(xì)胞在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)及濃度的總凋亡率均在6%以下,細(xì)胞周期結(jié)果顯示發(fā)生了G1/S期阻滯。由全基因組芯片結(jié)果中篩選出有意義的目的基因Caspase14,CLCA2,NDRG1以及CDH1均表達(dá)上調(diào),并且經(jīng)RT-PCR驗(yàn)證結(jié)果可靠,Western blot結(jié)果顯示其對(duì)應(yīng)的蛋白質(zhì)水平上表達(dá)同步升高。此外,在Western blot實(shí)驗(yàn)中我們同時(shí)驗(yàn)證了Vimentin、HPV16E6以及PARP表達(dá)下調(diào),E-Cadherin、P21以及P53表達(dá)上調(diào)。結(jié)論:異紫堇堿通過P53-P21途徑引發(fā)Si Ha細(xì)胞周期阻滯,抑制細(xì)胞增殖,同時(shí)調(diào)控CLCA2,NDRG1,Caspase14等多個(gè)分子逆轉(zhuǎn)上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化作用,抑制細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移,促進(jìn)宮頸癌Si Ha細(xì)胞向上皮細(xì)胞方向轉(zhuǎn)化從而抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展,發(fā)揮其抗癌作用。
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.33

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本文編號(hào)：1235367