本文關(guān)鍵詞：雌激素對(duì)雌性大鼠盆底肌間成纖維細(xì)胞機(jī)械應(yīng)力效應(yīng)的影響

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【摘要】：目的:研究17-β雌二醇(17-βE2)在特定加力強(qiáng)度下對(duì)雌性大鼠盆底骨骼肌間成纖維細(xì)胞中基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、金屬蛋白酶組織抑制劑-1(tissue inhibitor metalloproteinase,TIMP-1)及β-連環(huán)蛋白(β-Catenin)的影響。方法:1.研究對(duì)象取Wistar雌性大鼠6只均由山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心供給,喂養(yǎng)2周左右,體重平均120±30g,經(jīng)各項(xiàng)體格檢查均保持健康狀況。對(duì)雌性大鼠的處理符合中華人民共和國(guó)科學(xué)技術(shù)部頒發(fā)的《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見》[1]。2.成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)取Wistar雌性大鼠盆底骨骼肌間組織大約3-5mm,在體外采用II型膠原酶對(duì)成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)、鑒定及純化。選取體外穩(wěn)定傳代生長(zhǎng)的3-5代成纖維細(xì)胞,為后期17-β雌二醇干預(yù)提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。3.成纖維細(xì)胞應(yīng)力對(duì)體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞采用Flexercell4000外力加載系統(tǒng),同時(shí)設(shè)置特定加力時(shí)間為36小時(shí)和加力強(qiáng)度為6%。給予拉力后17-βE2繼續(xù)分別培養(yǎng)24小時(shí),不加力及不加藥組為對(duì)照組。4.實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)分別提取每組細(xì)胞的m RNA,進(jìn)行RT-PCR測(cè)定,記錄觀察指標(biāo)中每組的表達(dá)結(jié)果及電泳照相。結(jié)果:1.細(xì)胞培養(yǎng)情況體外行骨骼肌間組織原代培養(yǎng)成纖維細(xì)胞成功后,將所培養(yǎng)的細(xì)胞按照一定比例進(jìn)行細(xì)胞傳代。對(duì)原代培養(yǎng)出來的細(xì)胞進(jìn)行免疫組化鑒定,結(jié)果顯示波形蛋白呈陽性反應(yīng),角蛋白呈陰性反應(yīng)為成纖維細(xì)胞。2.機(jī)械拉伸在拉力時(shí)間為36小時(shí)和拉力強(qiáng)度為6%的特定條件下,觀察所培養(yǎng)的細(xì)胞損傷性變化越來越明顯。3.RT-PCR法檢測(cè)結(jié)果示:加力強(qiáng)度為6%及加力時(shí)間為36小時(shí)與對(duì)照組比,成纖維細(xì)胞中MMP-9m RNA表達(dá)量為2.69±0.02,高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。TIMP-1及β-catenin m-RNA的相對(duì)表達(dá)量分別為0.37±0.01、0.43±0.01,低于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。加力強(qiáng)度為6%及時(shí)間為36小時(shí)在17-βE2干預(yù)下,成纖維細(xì)胞MMP-9m RNA相對(duì)表達(dá)量為1.52±0.07,高于對(duì)照組,低于加力組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),TIMP-1及β-catenin m RNA的相對(duì)表達(dá)量為0.60±0.01、0.63±0.01,低于對(duì)照組,高于加力組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)成纖維細(xì)胞受到機(jī)械拉伸后,在特定的加力條件下,加力強(qiáng)度為6%及時(shí)間為36小時(shí)的條件下,成纖維細(xì)胞損傷性變化特別明顯。熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)拉力組MMP-9 m RNA表達(dá)量增加,TIMP-1及β-catenin m RNA表達(dá)量下降,使得I型膠原含量減少。而17-βE2干預(yù)后,使得拉力組應(yīng)力表現(xiàn)減弱,從而證明雌激素對(duì)盆底功能障礙性疾病具有保護(hù)作用。通過對(duì)成纖維細(xì)胞生物力學(xué)的研究,有助于揭示肛提肌組織不同程度的損傷在盆腔器官脫垂的發(fā)病機(jī)制。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R711

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

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本文編號(hào)：1174958