本文關(guān)鍵詞：乙肝病毒復(fù)制水平、基因變異與母嬰傳播宮內(nèi)感染關(guān)系的研究

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【摘要】：目的:通過(guò)對(duì)乙型肝炎母嬰患者進(jìn)行血清學(xué)、基因?qū)W檢測(cè)及流行病學(xué)調(diào)查,探討乙型肝炎病毒(HBV)血清標(biāo)志物、HBV-DNA含量及基因變異與母嬰傳播宮內(nèi)感染的關(guān)系,從而指導(dǎo)臨床對(duì)HBV母嬰傳播進(jìn)行有效的阻斷。方法:1按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)在石家莊市第六醫(yī)院和河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院收集乙肝孕婦共374例,簽署知情同意書(shū),收集相關(guān)資料,填寫(xiě)調(diào)查情況表;2采集上述入選孕婦靜脈血及其新生兒24h內(nèi)靜脈血或臍帶血,分離血清進(jìn)行相應(yīng)血清學(xué)及HBV-DNA定量檢測(cè)后,-20℃凍存。并對(duì)幼兒于出生后1月、6月和1年各采血一次,同樣的程序處理;3標(biāo)本在冷凍條件下分批送至河北省疾病預(yù)防控制中心-80℃凍存,復(fù)查血清學(xué)及HBV-DNA定量檢測(cè);4參考NCBI上已知的HBV全基因及各片段的基因序列,查找相關(guān)文獻(xiàn),設(shè)計(jì)并合成特異性的擴(kuò)增引物和測(cè)序引物;5采用SPSS19.0軟件對(duì)標(biāo)本血清學(xué)及HBV-DNA定量結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,選取試驗(yàn)組和對(duì)照組。計(jì)數(shù)資料用卡方檢驗(yàn),計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差,P0.05提示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;6分組提取HBV-DNA,PCR擴(kuò)增后測(cè)序;7測(cè)序結(jié)果用DNAStar軟件拼接后,分析HBV核苷酸和氨基酸的同源性,并對(duì)其基因變異特征進(jìn)行分析討論。結(jié)果:1乙肝孕婦374例中HBs Ag、HBe Ag、HBc Ab陽(yáng)性患者占48.66%(182/374),HBs Ag、HBe Ab、HBc Ab陽(yáng)性患者占39.57%(148/374),其余型別共11.77%(44/374);HBs Ag、HBe Ag、HBc Ab陽(yáng)性患者HBV-DNA檢出率為92.8%(169/182),HBs Ag、HBe Ab、HBc Ab陽(yáng)性患者HBV-DNA檢出率為47.3%(70/148),兩組患者lg HBV-DNA均數(shù)分別為7.26±1.56copies/ml、4.89±0.95copies/ml。兩組HBV-DNA陽(yáng)性檢出率比較,組間差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=84.83,P0.01)。兩組HBV-DNA含量對(duì)數(shù)值比較,P0.01,組間差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。375例新生兒出生24h內(nèi)HBs Ag陽(yáng)性檢出率為7.47%(28/375),HBV-DNA陽(yáng)性率為2.40%(9/375),其中6例新生兒HBs Ag和HBV-DNA均為陽(yáng)性,最后得出新生兒出生24h內(nèi)HBV感染數(shù)為31例,感染率為8.27%(31/375),并且其母親均為HBs Ag、HBe Ag、HBc Ab陽(yáng)性患者;幼兒出生1月后復(fù)查外周血HBV標(biāo)志物以及HBV-DNA,其中HBs Ag陽(yáng)性率為4.00%(15/375),HBV-DNA陽(yáng)性率為1.07%(4/375),其中2例幼兒HBs Ag和HBV-DNA均為陽(yáng)性,得出幼兒出生1月后HBV感染數(shù)為17例,感染率為4.53%(17/375);因此,新生兒出生24h內(nèi)與幼兒出生1月后感染率進(jìn)行比較,兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.36,P0.05)。幼兒出生6月后復(fù)查外周血HBs Ag和HBV-DNA陽(yáng)性率分別為3.73%(14/375)、1.07%(4/375);幼兒出生1年后復(fù)查結(jié)果與出生6月后無(wú)差別。2 HBV S基因核苷酸同源性比較結(jié)果顯示,編號(hào)A68、A7、A7B0與參考序列AF100309的同源性分別為99.7%、99.3%、99.3%,屬于B基因型,試驗(yàn)中其他標(biāo)本與AF286594同源性均大于98.5%,屬于同一基因型C型;另外,母親與新生兒出生24h比較,A7與A7B0、A41與A41B0、A31與A31B0、A72與A72B0、A90與A90B0、A135與A135B0的同源性分別為100%、98.2%、100%、99.9%、99.8%、99.9%,幼兒出生后1月與6月甚至1年,基因也均無(wú)明顯變化,同源性很高。常見(jiàn)的基因變異有:A7與A7B0共同變異345G→A、793G→A、796G→T、799G→A,A41B0、a89、A106共同變異783G→A、592C→T,A41B0與A198共同變異508G→A,A31、A198、A219共同變異499T→C,A41與A41B0共同變異289A→T,A41基因變異302G→A、241A→G、320C→G,A68基因變異482A→G、724C→T,A41B0基因變異438T→C、776A→C、759G→C,引起相應(yīng)的氨基酸變異有:A7與A7B0共同變異Y64C、I213M,A41B0與a89、A106共同變異N210S,A41氨基酸變異S50G,A68氨基酸變異V110I,A41B0氨基酸變異S95L、L208I、A202G。3所有標(biāo)本Pre-S基因核苷酸同源性比較結(jié)果均在96%以上,常見(jiàn)的變異有:A41、A31、A135、A72共同變異2860G→A引起氨基酸變異Q4K,A7、A7B0共同變異3061C→T引起氨基酸變異P72L,A7、A41、A41B0共同變異3081T→G引起氨基酸變異G79W,還有很多突變?nèi)鏏7基因變異3059T→A,A41B0基因變異3062A→C,A7、A7B0基因變異3092G→A未引起氨基酸變異。幼兒出生后1月與6月甚至1年,基因均無(wú)變化。4 HBV X區(qū)相同基因型標(biāo)本之間核苷酸同源性均在96%以上,常見(jiàn)的變異有:A135基因變異2143A→G,A173、A226共同變異2146C→T,A31、A135共同變異2167A→G,A7、A222、A226共同變異2182G→T,A31、A72、A173、A198、A219共同變異2198T→C,均未引起氨基酸的變異。幼兒出生后1月與6月甚至1年,基因均無(wú)變化。5所有標(biāo)本HBV C區(qū)核苷酸同源性比較結(jié)果均在96%以上�；蜃儺愑�:1915G→A,1936T→C,2011G→A,3205T→C,但是引起相應(yīng)的氨基酸變化僅有一個(gè)D61Y。幼兒出生后1月與6月甚至1年,基因均無(wú)變化。6 HBV P區(qū)相同基因型標(biāo)本之間核苷酸同源性均在96%以上。P區(qū)基因變異除去與S區(qū)基因重疊部分外,仍有變異:A106、A198、A219共同變異855T→A引起氨基酸變異M573L,A106、a129共同變異876 C→T引起氨基酸變異Y579I,A41、A41B0、A90共同變異1092 C→T引起氨基酸變異Y651H,以及未引起氨基酸變異的突變A41、A41B0、A90共同變異1479C A,A41、A41B0共同變異1497 T→G。幼兒出生后1月與6月甚至1年,基因均無(wú)變化。結(jié)論:1 HBs Ag、HBe Ag、HBc Ab陽(yáng)性孕婦患者HBV-DNA陽(yáng)性檢出率明顯高于HBs Ag、HBe Ab、HBc Ab陽(yáng)性和其他患者;孕婦體內(nèi)HBV-DNA含量的高水平表達(dá)會(huì)增加母嬰傳播宮內(nèi)感染的機(jī)率。2新生兒出生24h內(nèi)的血清HBs Ag和HBV-DNA攜帶情況,不能作為判斷母嬰傳播宮內(nèi)感染的標(biāo)準(zhǔn)。3 HBV S基因中302G→A、345G→A引起的氨基酸變異S50G、Y64C,可能是導(dǎo)致母嬰傳播宮內(nèi)感染的原因。4 Pre-S、X、C、P基因片段在母嬰傳播宮內(nèi)感染標(biāo)本和對(duì)照組中均有突變出現(xiàn),其突變意義還不能確定,仍需做進(jìn)一步的研究。5除編號(hào)A41母子基因同源性為97.2%外,短時(shí)間內(nèi)母子HBV基因無(wú)變異。
【關(guān)鍵詞】：乙型肝炎病毒 母嬰傳播宮內(nèi)感染 HBV-DNA 基因變異
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R714.251
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 英文縮寫(xiě)13-14
• 前言14-16
• 材料與方法16-23
• 結(jié)果23-27
• 附圖27-32
• 附表32-41
• 討論41-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-48
• 綜述 乙肝病毒宮內(nèi)感染機(jī)制及危險(xiǎn)因素的研究進(jìn)展48-56
• 參考文獻(xiàn)52-56
• 致謝56-57
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷57

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1091188