本文關(guān)鍵詞：基于腸道易吸收納米對(duì)比劑的大腸腫瘤MR成像研究

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【摘要】：目的以多功能固體脂質(zhì)納米粒(solid lipid nanoparticles,SLNs)為載體,負(fù)載磁共振對(duì)比劑釓噴替酸葡甲胺(gadolinium diethylenetriaminepentaacetic acid,Gd-DTPA)及異硫氰酸熒光素(octadecylamine fluorescein isothiocyanate, FITC)而制備的腫瘤易吸收的多功能磁共振(magnetic resonance,MR)納米對(duì)比劑,通過(guò)該MR納米對(duì)比劑體外細(xì)胞及動(dòng)物模型直腸給藥,體外細(xì)胞及大腸壁吸收納米對(duì)比劑后于SET1WI序列MR增強(qiáng)顯示不同細(xì)胞模型、正常腸壁及腫瘤,探討成像機(jī)制,以建立大腸腫瘤新型MR成像方法。材料與方法以硬脂酸、FITC及Gd-DTPA為原料,采用乳化-溶劑揮發(fā)法合成Gd-FITC-SLN.首先,通過(guò)激光粒度分析儀和掃描電鏡檢測(cè)納米顆粒粒徑,Zeta電位分析儀檢測(cè)其表面電荷,熒光分光光度計(jì)測(cè)試其包封率,最后通過(guò)加速穩(wěn)定性試驗(yàn)測(cè)試納米材料的穩(wěn)定性,從而完成該材料的表征測(cè)試。其次,以人結(jié)腸癌細(xì)胞(HT29)和小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞(CT26)為細(xì)胞研究模型,通過(guò)CCK-8,流式細(xì)胞術(shù),免疫熒光結(jié)合共聚焦激光掃描顯微鏡,完成納米材料的細(xì)胞毒性、細(xì)胞吸收及亞細(xì)胞定位研究；并采用MR成像技術(shù)探索細(xì)胞水平成像機(jī)制。接著,取50只正常C57BL小鼠隨機(jī)分成兩組,分別予小鼠Gd-FITC-SLN(10g/Kg體重)或蒸餾水灌腸給藥,觀(guān)察實(shí)驗(yàn)組(Gd-FITC-SLN)有無(wú)死亡或明顯毒性反應(yīng),并于14天后取結(jié)腸組織進(jìn)行組織病理切片,并分析其血液學(xué)和血清生化學(xué)檢查,以完成納米材料對(duì)小鼠體內(nèi)毒理試驗(yàn)。然后,動(dòng)物活體成像部分,通過(guò)氧化偶氮甲烷/葡聚糖硫酸鈉(azoxymethane/dextran sulfate sodium, AOM/DSS)誘導(dǎo)雌性C57BL小鼠結(jié)腸腫瘤(高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變),采用3.0-T高場(chǎng)強(qiáng)MR成像系統(tǒng)(GE, SIGNA HD)與特制鼠類(lèi)專(zhuān)用線(xiàn)圈,將小鼠分為(1)實(shí)驗(yàn)組Gd-FITC-SLN(40 mg/mL, N=4)與(2)對(duì)照組Gd-DTPA (13.92 mg/mL, N=4)兩組,分別進(jìn)行對(duì)比劑直腸灌注,分別于灌腸前、保留灌腸后20分鐘、40分鐘、60分鐘和80分鐘動(dòng)態(tài)掃描,主要掃描序列為SE Tl WI序列,基本參數(shù)如下：TR/TE,550/15 ms;四個(gè)不同的TI(500,650,800,950 ms)便于檢測(cè)T1值。最后,取正常大腸壁及病變組織進(jìn)行組織細(xì)胞學(xué)分析。結(jié)果該納米對(duì)比劑平均粒徑220nm, Gd-FITC-SLNs中平均Gd-DTPA負(fù)載率為29.76±4.48%(w/w), Gd-DTPA的包封率為55.00%。兩種大腸癌細(xì)胞CT-26和HT-29細(xì)胞在Gd-FITC-SLNs的濃度范圍分別為0-200μg/mL和0-600μg/mL時(shí)無(wú)明顯細(xì)胞毒性(P0.05)；同時(shí)這兩種細(xì)胞對(duì)于Gd-FITC-SLNs有明顯攝取且具有濃度依賴(lài)性(P0.001),納米對(duì)比劑主要分布在細(xì)胞漿內(nèi)。小鼠體內(nèi)毒理試驗(yàn)中,小鼠均沒(méi)有死亡或明顯的毒性反應(yīng)。對(duì)于A(yíng)OM/DSS誘導(dǎo)C57BL小鼠腫瘤模型活體成像,對(duì)比劑保留灌腸20分鐘,期間正常腸壁與腫瘤組織對(duì)于對(duì)比劑均有吸收強(qiáng)化,但兩者強(qiáng)化程度不同,腫瘤強(qiáng)化程度低于正常腸壁。實(shí)驗(yàn)組中結(jié)腸腫瘤的信噪比(SNRs)增加了2.29倍,較對(duì)照組有顯著強(qiáng)化(P0.001)。共聚焦熒光顯微鏡也證實(shí)納米對(duì)比劑在腫瘤中的分布有差異,腫瘤包膜下分布較腫瘤實(shí)質(zhì)內(nèi)多。結(jié)論1.負(fù)載Gd-DTPA及FITC的固體脂質(zhì)體納米粒具備腸道易吸收、Gd-DTPA負(fù)載量大、高順磁性以及組織學(xué)可直接檢測(cè)等特點(diǎn)。2.體外不同大腸癌細(xì)胞對(duì)于該納米對(duì)比劑均有明顯快速吸收,可以實(shí)現(xiàn)細(xì)胞水平成像。3.該納米對(duì)比劑細(xì)胞及小鼠體內(nèi)毒理實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了安全性,有望實(shí)現(xiàn)臨床轉(zhuǎn)化。4.基于固體脂質(zhì)體納米粒的新型MR大腸成像方法在大腸腫瘤模型中的應(yīng)用表明該方法具有可行性,并有助于腫瘤早期診斷,開(kāi)辟一種新型分子MR成像方法。
【關(guān)鍵詞】：固體脂質(zhì)納米粒 釓噴替酸葡甲胺 異硫氰酸熒光素 磁共振成像 高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R445.2;R735.34
【目錄】：

• 致謝4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 專(zhuān)業(yè)術(shù)語(yǔ)和縮寫(xiě)詞表11-13
• 前言13-16
• 第一章 材料與方法16-24
• 第二章 結(jié)果24-39
• 第三章 討論39-42
• 第四章 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-48
• 文獻(xiàn)綜述48-59
• 參考文獻(xiàn)54-59
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷59-60

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 Antonio Facciorusso;Matteo Antonino;Marianna Di Maso;Michele Barone;Nicola Muscatiello;;Non-polypoid colorectal neoplasms:Classification,therapy and follow-up[J];World Journal of Gastroenterology;2015年17期

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本文編號(hào)：957115