本文關鍵詞：miR-21調控大鼠BMSCs向肌成纖維細胞分化的機制研究

  更多相關文章： 頜骨纖維化 骨髓間充質細胞 肌成纖維細胞 轉化生長因子-β1 miRNA-21

【摘要】：研究報導放療誘導的纖維萎縮機制在放射性頜骨壞死中起重要作用,但具體的調控機制尚不明確。通過多種纖維化疾病研究的文獻發(fā)現mi R-21與TGF-β1在纖維化過程中參與調控作用,因此本實驗通過研究大鼠骨髓間充質細胞向肌成纖維細胞分化的過程,探討mi R-21是否調控了TGF-β1對大鼠骨髓間充質細胞向肌成纖維細胞的誘導分化過程。此研究有望深入闡述放射性頜骨壞死中頜骨纖維萎縮機制的具體調控機制,為進一步治療和預防提供新靶點。目的:檢測TGF-β1誘導大鼠BMSCs成纖維細胞和肌成纖維細胞分化過程中mi R-21的基因表達,同時探討mi R-21在體外大鼠BMSCs成纖維細胞分化過程中的調控作用。為治療頜骨纖維化提供了一個新的靶點。方法:1.原代獲得大鼠骨髓間充質細胞,并進行分離純化培養(yǎng)。并用一定濃度的TGF-β1對大鼠骨髓間充質細胞向肌成纖維細胞進行誘導分化。2.Real-time PCR檢測大鼠骨髓間充質細胞向肌成纖維細胞誘導過程中mi R-21基因表達水平差異。3.利用mi R-21基因模擬物mimics和inhibitor對大鼠骨髓間充質細胞進行轉染,使其過表達或者下調,Real-time PCR和Western blot檢測肌成纖維細胞的相關基因和蛋白α-SMA的表達,觀察mi R-21對大鼠骨髓間充質細胞的生物學影響。3.mi R-21基因的mimics模擬物轉染大鼠骨髓間充質細胞后,加入一定濃度的TGF-β1,Western blot和免疫細胞化學法檢測肌成纖維細胞的相關蛋白α-SMA的表達,從而明確mi R-21對大鼠骨髓間充質細胞向肌成纖維細胞的調控作用是否與TGF-β1通路相關。結果:本實驗發(fā)現一定濃度的TGF-β1可以誘導大鼠骨髓間充質細胞向肌成纖維細胞分化,在此過程中mi R-21基因的表達上調,并且具有時間依賴性和劑量依賴性。一定濃度的TGF-β1處理后mi R-21表達升高且在處理后的48h表達量達到最高峰值。當TGF-β1的濃度為5ng/ml時,mi R-21的表達最高。人工合成的mi R-21 mimics轉染至大鼠BMSCs后能夠有效提高mi R-21表達量從而促進了細胞α-SMA基因和蛋白的表達,而人工合成的mi R-21 inhibitor轉染后能夠有效下調mi R-21表達量從而降低了細胞α-SMA基因和蛋白的表達;mi R-21 mimics增加了TGF-β1刺激大鼠BMSCs向肌成纖維細胞分化的作用,表明mi R-21為促纖維化的基因。結論:本研究發(fā)現,mi R-21能夠正調控TGF-β1誘導的大鼠骨髓間充質細胞向肌成纖維細胞分化并高表達α-SMA。本研究為纖維萎縮機制的基因水平研究提供了初步理論依據,為抗頜骨纖維化的基因治療提出了新的理論。
【關鍵詞】：頜骨纖維化 骨髓間充質細胞 肌成纖維細胞 轉化生長因子-β1 miRNA-21
【學位授予單位】：上海交通大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R730.55;R739.91
【目錄】：

• 摘要5-8
• ABSTRACT8-13
• 縮略語表13-15
• 緒論15-21
• 國內外研究現狀15-19
• 本課題研究基礎19-21
• 第一部分 大鼠骨髓間充質細胞的分離培養(yǎng)及多向分化能力鑒定21-37
• 1 材料與方法21-25
• 2 實驗步驟25-30
• 3 結果30-33
• 4 討論33-35
• 5 結論35-37
• 第二部分 外源性TGF-β1 誘導大鼠骨髓間充質細胞MIR-21表達的體外研究37-46
• 1 材料與方法37-38
• 2 實驗步驟38-40
• 3 實驗結果40-42
• 4 討論42-45
• 5 結論45-46
• 第三部分 MIR-21調控大鼠骨髓間充質細胞向肌成纖維細胞分化的體外研究46-59
• 1 材料與方法46-47
• 2 實驗步驟47-49
• 3 實驗結果49-55
• 4 討論55-58
• 5 結論58-59
• 結束語59-62
• 全文總結59-60
• 工作創(chuàng)新點60-61
• 進一步工作計劃61-62
• 參考文獻62-67
• 第一作者文章67-68
• 個人簡歷68-70
• 致謝70-71

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本文編號：654335