本文關鍵詞：熒光標記共培養(yǎng)實驗模型的構建及其在DNA輻射損傷旁效應檢測的應用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 建立研究電離輻射誘導的細胞旁效應DNA損傷的新的實驗模型，探究γ射線及低劑量的α粒子輻射產(chǎn)生的旁效應DNA雙鏈斷裂（DSBs）和修復的效應特征。 方法： 構建定位于在細胞胞漿中的帶有表達紅色熒光蛋白標簽的pDsRed1-N1-Hspc300重組質(zhì)粒，將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到人皮膚成纖維細胞（HFS）中，篩選出穩(wěn)定表達的HFS-RFP-Hspc300細胞系。將其中一種細胞進行電離輻射（γ射線和低劑量的α粒子），另一種細胞作為輻射旁效應細胞，把兩種細胞混合培養(yǎng)，在不同的時間點收集細胞，利用免疫熒光共聚焦反應，觀察鏡下輻照細胞和旁效應細胞的細胞核內(nèi)γH2AX的foci個數(shù)，從而探究細胞輻射旁效應的DNA損傷和修復情況（主要是DNA的雙鏈斷裂損傷情況（DSBs））。 結(jié)果： 1．建立了HFS-RFP-Hspc300細胞和HFS細胞共培養(yǎng)的細胞DNA損傷輻射旁效應研究實驗模型。 2．2Gy60Coγ射線照射細胞混合后，直接受照射的HFS細胞與旁效應細胞HFS-RFP細胞γH2AX的數(shù)目變化情況相似，均在照射后30min出現(xiàn)最大值，隨后慢慢降低，照后各時間點與對照組比較均有顯著性差異（P0.05）。 3．不同低劑量的α粒子照射，直接受照細胞HFS-RFP和旁效應細胞HFS中的γH2AX簇集點數(shù)隨時間變化的趨勢相似，均在照后1h達到高峰，并且24h時還是和0h的情況有顯著性差異（P0.05）。輻照細胞不同時間點的比較，在30min、2h、4h，不同劑量間有顯著性差異（P0.05），在1h和8h時間點出現(xiàn)兩個γH2AX foci峰值。 結(jié)論： 1．成功構建了電離輻射細胞DNA損傷旁效應研究模型。 2．γ射線照射能引起細胞的旁效應，其效應與輻照細胞相同，并慢慢的修復。 3．低劑量的α粒子照射能誘導旁效應DSB損傷與修復的變化，并且其變化趨勢與相似直接照射的細胞相似，都能產(chǎn)生二次DSB損傷。
【關鍵詞】：α粒子輻射 γ射線 旁效應 激光共聚焦 DNA損傷修復
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R818
【目錄】：

• 主要英文縮略語索引5-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-15
• 第一部分 輻射旁效應DNA損傷模型的構建15-25
• 1 材料15-18
• 1.1 實驗細胞15
• 1.2 質(zhì)粒與菌株15-16
• 1.3 主要試劑16-17
• 1.4 主要儀器17-18
• 2 方法18-24
• 2.1 細胞培養(yǎng)18
• 2.2 質(zhì)粒構建18-22
• 2.3 穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系 HFS-RFP 的構建22-23
• 2.4 輻射旁效應模型的構建23-24
• 3 結(jié)果24-25
• 3.1 穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系 HFS-RFP 的鑒定24
• 3.2 細胞共培養(yǎng)輻射旁效應細胞模型的構建24-25
• 第二部分 γ射線誘導的細胞輻射旁效應25-33
• 1 材料25-26
• 1.1 實驗細胞25-26
• 1.2 實驗試劑26
• 1.3 主要儀器26
• 2 方法26-27
• 2.1 細胞培養(yǎng)26
• 2.2 細胞照射26-27
• 2.3 免疫熒光反應27
• 2.4 激光共聚焦顯微觀察和結(jié)果分析27
• 2.5 統(tǒng)計方法27
• 3 結(jié)果27-33
• 3.1 免疫熒光圖片27-29
• 3.2 細胞在不同時間點 γH2AX 的 foci 量29-33
• 第三部分 α粒子照射誘導的細胞旁效應33-40
• 1 材料33
• 1.1 實驗細胞33
• 1.2 實驗試劑33
• 1.3 實驗器材33
• 2 方法33-35
• 2.1 細胞培養(yǎng)33-34
• 2.2 細胞照射34
• 2.3 細胞免疫熒光染色34
• 2.4 激光共聚焦顯微觀察和結(jié)果分析34-35
• 2.5 統(tǒng)計方法35
• 3 結(jié)果35-40
• 3.1 低劑量α粒子誘發(fā) DNA 雙鏈斷裂（DSB）旁效應35-40
• 討論40-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻45-51
• 綜述51-65
• 參考文獻57-65
• 碩士期間發(fā)表的論文和參與的科研項目65-66
• 致謝66

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 單梁;肖樂樂;趙曉紅;馮藝;唐文強;關欣;;北京早園竹葉有機提取物對細胞DNA斷裂損傷的保護與修復作用[J];環(huán)境與健康雜志;2011年02期

2 段小麗;汪翠萍;王貝貝;黃楠;張金良;;多環(huán)芳烴暴露生物標志物的研究進展[J];環(huán)境與健康雜志;2011年03期

3 梁春梅;操基玉;王勇;馮哲偉;汪磊;;油煙中細顆粒物致胎鼠肺泡Ⅱ型上皮細胞DNA損傷的研究[J];環(huán)境與健康雜志;2011年10期

4 蔣磊;王靜;王艷;李韶山;江月玲;;紫外輻射誘導植物細胞DNA損傷的彗星檢測[J];華南師范大學學報(自然科學版);2006年04期

5 王坤英;李衛(wèi)國;趙艷紅;趙俊偉;;重金屬鉻對黑斑蛙胚胎和蝌蚪生長發(fā)育的影響及血細胞DNA損傷效應[J];河南師范大學學報(自然科學版);2007年04期

6 李瑞清;富昊偉;崔海瑞;張華麗;舒慶堯;;水稻DNA損傷修復同源基因純合突變系的鑒定[J];核農(nóng)學報;2012年03期

7 姜薇;趙曉紅;米生權;李爽;王健;賀旭;;番茄紅素對大氣可吸入顆粒物致人肺成纖維細胞DNA損傷的保護作用[J];環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學;2008年06期

8 徐海娟;王新明;;彗星試驗和微核試驗測試廣州市顆粒物有機組份遺傳毒性[J];中國熱帶醫(yī)學;2008年08期

9 黃潔;徐文清;沈秀;劉強;;石花多糖對輻射損傷小鼠防護作用的研究[J];中國生化藥物雜志;2008年01期

10 卜元卿;駱永明;滕應;李振高;;銅暴露下赤子愛勝蚓(Eisenia foetida)活體基因的損傷研究[J];生態(tài)毒理學報;2006年03期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張坤;齊浩;任兆玉;陳文芳;劉穎;艾霞;;UV誘導的細胞DNA損傷檢測[A];第七屆全國光生物學學術會議論文摘要集[C];2010年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳文芳;磁場對不同細胞的生物效應與磁場增強抗癌藥物殺傷不同腫瘤細胞的機制初探[D];陜西師范大學;2011年

2 劉強;腫瘤細胞輻射敏感性評價及ANTP-Smac N7融合肽的腫瘤細胞輻射增敏作用研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2011年

3 張遵真;DNA氧化損傷修復基因HOGG1低表達細胞株的建立及其應用研究[D];四川大學;2005年

4 金言;雷公藤氯內(nèi)酯醇誘導腫瘤細胞凋亡的分子機制探討[D];中國科學院研究生院（上海生命科學研究院）;2005年

5 徐海娟;廣州大氣顆粒物不同組分遺傳毒性初步研究[D];中國科學院研究生院（廣州地球化學研究所）;2007年

6 徐進;乙酸鉛誘導PC 12細胞凋亡的信號途徑研究[D];浙江大學;2008年

7 徐進;基于空間光調(diào)制器的大動態(tài)范圍圖像采集系統(tǒng)研究[D];浙江大學;2008年

8 張坤;紫外線誘導的細胞DNA損傷模式研究[D];西北大學;2009年

9 胡迎芬;冬棗黃酮的提取分離及抗氧化、抑瘤活性研究[D];青島大學;2009年

10 陳浙泊;高動態(tài)范圍成像技術的研究[D];浙江大學;2009年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 馬俊;基于LCoS的HDR實時圖像獲取系統(tǒng)研究[D];浙江大學;2011年

2 朱良銷;高動態(tài)范圍成像系統(tǒng)的研究[D];電子科技大學;2011年

3 陸慧賢;水環(huán)境鎘對縊蟶毒理學效應的研究[D];寧波大學;2011年

4 王文娟;硒對MMC致人外周血淋巴細胞遺傳損傷的影響[D];山西醫(yī)科大學;2005年

5 屈穎;中波段紫外線誘導細胞DNA損傷及損傷修復中鈣信號的研究[D];西北大學;2006年

6 劉淼;UV介導的細胞DNA損傷及損傷后修復的初步研究[D];陜西師范大學;2006年

7 王淑瑞;磁場結(jié)合抗腫瘤藥物對腫瘤生物效應的初步研究[D];陜西師范大學;2006年

8 姜薇;北京城區(qū)大氣可吸入顆粒物對肺細胞的損傷作用及其機制的研究[D];首都師范大學;2007年

9 陳波;GSM 1800 MHz射頻電磁場對小鼠胚胎干細胞DNA損傷的影響[D];浙江大學;2007年

10 蔣磊;UV-B誘導植物DNA損傷和紫外吸收化合物形成的研究[D];華南師范大學;2007年

  本文關鍵詞：熒光標記共培養(yǎng)實驗模型的構建及其在DNA輻射損傷旁效應檢測的應用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：430359