【摘要】： 目的通過應用Bruker公司的Avance 9.4T液態(tài)離體型高場強、高分辨率核磁共振頻譜儀定量分析亞硒酸鈉染毒后,大鼠肝臟急性損傷而發(fā)生細胞凋亡時,膽堿復合物的變化。 方法:20只雄性Wistar大鼠隨機分成對照及實驗兩組,每組10只。實驗組按20mmol/kg予以亞硒酸鈉溶液腹腔注射染毒,對照組僅給予1ml/kg劑量的蒸餾水進行腹腔注射。所有大鼠均犧牲并取得肝臟。1H-MRS數(shù)據(jù)采集使用離體型9.4T高分辨率核磁共振頻譜儀(Bruker Avance 400 MHz )。所得頻譜在頻率域經(jīng)XWINNMR (Bruker GmBH)軟件初步處理后,再應用MestRe-c 4.3軟件進一步分析。HE及TUNEL染色被使用來觀察和確定肝臟細胞的變化。 結(jié)果:質(zhì)量良好的高氯酸提純大鼠肝組織物氫質(zhì)子頻譜被獲得,常規(guī)的肝臟各種水溶性代謝物被探測到并被定位。通過軟件積分及公式計算,總膽堿混合物的濃度在對照組是5.08+0.97mmol/L,實驗組濃度3.81+1.16;游離膽堿濃度在對照組濃度為1.07+0.23 mmol/L,實驗組為0.65+0.20。兩組物質(zhì)在兩組間存在統(tǒng)計學意義(p值分別為P0.05和p0.01)。但是比較兩組間的合成膽堿(主要含有磷酸膽堿及甘油磷酸膽堿)濃度卻不存在統(tǒng)計學意義(p0.05)。HE組織學檢測,在100倍光鏡下發(fā)現(xiàn)實驗組的肝竇較對照組的增寬,400倍鏡下可見實驗組肝臟細胞形態(tài)不規(guī)則,邊界不清,胞漿內(nèi)可見體積增大,數(shù)目增多的類圓型的空泡形成,存留細胞質(zhì)較濃,濃染的、存留的隨意散布的染色質(zhì)被觀及,部分細胞核核仁消失,視野內(nèi)未見明顯的炎癥反應。實驗組及對照組發(fā)生凋亡的肝臟細胞均被TUNEL染色染成棕色而證實。 結(jié)論:高劑量、高濃度的亞硒酸鈉溶液能導致大鼠肝臟損傷,在活體內(nèi)引起肝細胞凋亡。離體型高分辨率核磁共振頻譜能探測到各種不同的代謝物。在細胞凋亡早期,膽堿混合物的不同成分變化傾向不完全一致。
【圖文】：

汕頭大學醫(yī)學院碩士畢業(yè)論文圖2－1 9.4T離體型高分辨率核磁共振掃描儀（Bruker Avance 400 MHz）Fig 2－1 in vitro 9.4T high resolution magnetic resonance spectrometer（BrukerAvance 400 MHz）凍干濃縮一體機：FREEZE DRY SYSTEM /FREEZONE 4.5凍干濃縮一體機，是美國LABCONCO推出的新型凍干濃縮一體機。主要特點為能在低溫條件下將樣品中的水分除去，，以達到干燥及長期保存的效果；微量電子天平：瑞士梅特勒－托利多（Mettle Toledo）公司制造，型號為UMX2；德國Eppendorf加樣槍；德國Eppendorf高速臺式低溫離心機以離心管；超低溫冰箱：New Brunswick Scientific（NBS）公司生產(chǎn)的U410型號；高速勻漿機；50 ml及100ml燒杯；xO缽及

作用為內(nèi)標準。D2O的作用是鎖場。每一個樣本數(shù)據(jù)采集均在離體型 9.4T高分辨率核振頻譜儀 (Bruker Avance 400 MHz)進行。提純物頻譜通過含有抑水脈沖的 Bruker z列獲得。帶寬為5000 Hz ，采集數(shù)據(jù)點為4096, 掃描次數(shù)為128次，總掃描時間為。 頻譜在頻率域上經(jīng)機器自帶的 XWINNMR (Bruker GmBH)軟件初步處理, 處理過程包括傅立葉轉(zhuǎn)換、相位更正、基線更正及位移更正。代謝物的化學位移通過參照TMS置確定。 核磁共振頻譜數(shù)據(jù)通過MestRe-c 4.3進一步分析。2.5 統(tǒng)計學分析通過應用MestRe-c 4.3軟件對化學位移為各種膽堿復合物及TMSP的代謝峰分別進行面積計算及積分處理，其過程簡而言之為：首先應用軟件對所要積分的峰進行篩選，應用軟件自帶的譜線擬和功能對譜線進行模擬，得到新的譜線，新模擬譜圖如下圖1示。
【學位授予單位】：汕頭大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R445.2

【參考文獻】

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1 宋愛琴,孫立榮,龐秀英,李學榮,董增義,盧愿;兒童急性淋巴細胞性白血病細胞凋亡與臨床相關性研究[J];青島大學醫(yī)學院學報;2002年03期

2 李艷輝;肖恩華;;實驗性肝損傷模型的建立和評價[J];放射學實踐;2006年10期

3 劉曉云;馮雨;劉超;;硒與甲狀腺疾病[J];國際內(nèi)科學雜志;2007年12期

4 黃代娟;放射性核素標記annexin V凋亡顯像在腫瘤研究中的進展[J];國外醫(yī)學(放射醫(yī)學核醫(yī)學分冊);2003年04期

5 王曉峰;徐立紅;;Cr(Ⅵ)染毒對小鼠肝臟細胞凋亡以及凋亡相關蛋白的影響[J];環(huán)境科學學報;2008年03期

6 田建廣,杜澤涵;核磁共振在細胞凋亡研究中的應用[J];軍事醫(yī)學科學院院刊;1998年04期

7 劉家國;趙洪進;劉艷娟;劉永旺;王小龍;;不同形式硒對二乙基亞硝胺致大鼠肝癌細胞因子和血管生成調(diào)節(jié)因子的影響[J];南京農(nóng)業(yè)大學學報;2007年01期

8 張莉;李俊峽;祝玉芬;;磁共振分子影像學研究進展[J];人民軍醫(yī);2007年10期

9 李華,王吉波;細胞凋亡與系統(tǒng)性紅斑狼瘡[J];山東醫(yī)藥;2005年16期

10 姚琦;袁丁;;類風濕性關節(jié)炎滑膜細胞凋亡研究進展[J];陜西醫(yī)學雜志;2006年07期

本文編號：2634573